[發明專利]熒光定量的指標確定方法

有效

• 申請號: 202110025425.8
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112342282B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 李冬;楊智;賀賢漢
• 申請（專利權）人: 杭州博日科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 杭州創智卓英知識產權代理事務所(普通合伙) 33324
• 代理人: 張超

本發明提供了一種熒光定量的指標確定方法，包括采集第一數量個循環對應的初始熒光定量PCR擴增數據；對第一數量中前第二數量個循環對應的初始PCR擴增數據進行線性擬合，確定擴增曲線基線；對初始PCR擴增數據去基線，得到目標PCR擴增數據；針對第一數量中除前第二數量以外的后第三數量個循環對應的目標PCR擴增數據，確定所述第三數量個循環對應的目標PCR擴增數據中熒光強度連續遞增的第四數量個循環；針對所述第四數量個循環對應的目標PCR擴增數據取對數；運用自適用多項式擬合方式，找到目標窗口對應的目標指數區域；根據所述目標指數區域確定PCR的指標。本發明在原始熒光強度的基礎上消除基線，從而去除其影響，計算簡便，容易實現且精度高。

技術領域

本發明涉及熒光定量檢測技術領域，尤其是涉及一種熒光定量的指標確定方法。

背景技術

目前，診斷傳染病標準的核酸定量方法仍然多采用熒光實時定量PCR，其能夠量化樣品模板的初始值，常被用在基因分析表達、轉基因食物檢測和癌癥檢測中。它通常依靠標準曲線或參照基因來測定核酸量，但基于標準曲線的方法需要滿足一個苛刻的假設條件，即在所有樣本中，每個擴增子的PCR效率是恒定的。

而現有文獻、實驗表明，在很多情況下，這一假設難以達到。同時，在確定樣本的Ct值方面，現有方法一般簡單將3-15個循環的熒光信號標準偏差10倍對應的閾值作為Ct值確定依據、或者利用sigmoid、Richards等曲線模型，基于LM方法（Levenberg-Marquardt方法）、Akima插值法等純數學方法進行擬合，得到擬合參數。閾值法只是一種經驗做法，而Richards曲線模型擬合等數學方法雖然能得到較好的擬合效果，但計算復雜、無形中也與PCR指數擴增特性脫離了聯系。

發明內容

本發明的目的在于提供一種熒光定量的指標確定方法，以緩解了現有技術中存在的計算復雜的技術問題。

第一方面，本發明實施例提供一種熒光定量的指標確定方法，包括：

采集第一數量個循環對應的初始熒光定量PCR擴增數據；

對第一數量中前第二數量個循環對應的初始PCR擴增數據進行線性擬合，確定擴增曲線基線；

對初始PCR擴增數據去基線，得到目標PCR擴增數據；

針對第一數量中除前第二數量以外的后第三數量個循環對應的目標PCR擴增數據，確定所述第三數量個循環對應的目標PCR擴增數據中熒光強度連續遞增的第四數量個循環；

針對所述第四數量個循環對應的目標PCR擴增數據取對數；

運用自適用多項式擬合方式，找到目標窗口對應的目標指數區域；

根據所述目標指數區域確定PCR的指標。

在可選的實施方式中，自適用多項式擬合方式包括自適用Savitzky-Golay線性擬合方式。

在可選的實施方式中，運用自適用多項式擬合方式，找到目標窗口對應的目標指數區域的步驟，包括：

根據Savitzky-Golay擬合原理及循環總數，確定窗口大小選擇范圍；

在選擇范圍中依次確定當前窗口大小，針對每個當前窗口大小，在當前窗口大小對應的每一個滑動平移位置，計算決定系數；以及取當前窗口大小中最大的決定系數其對應初始窗口為當前窗口大小對應的最優指數區域；

在初始窗口中選擇最優的目標指數區域。

在可選的實施方式中，在所述初始窗口中選擇最優的目標指數區域的步驟，包括：