[發明專利]熒光定量的指標確定方法

有效

• 申請號: 202110025425.8
• 申請日: 2021-01-08
• 公開（公告）號: CN112342282B
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 李冬;楊智;賀賢漢
• 申請（專利權）人: 杭州博日科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851
• 代理公司: 杭州創智卓英知識產權代理事務所(普通合伙) 33324
• 代理人: 張超

1.一種熒光定量的指標確定方法，其特征在于，包括：

采集第一數量個循環對應的初始熒光定量PCR擴增數據；所述第一數量個循環為所有循環；

對所述第一數量中前第二數量個循環對應的初始PCR擴增數據進行線性擬合，確定擴增曲線基線；

對所述初始PCR擴增數據去基線，得到目標PCR擴增數據；

針對所述第一數量中除前第二數量以外的后第三數量個循環對應的目標PCR擴增數據，確定所述第三數量個循環對應的目標PCR擴增數據中熒光強度連續遞增的第四數量個循環；

針對所述第四數量個循環對應的目標PCR擴增數據取對數；

根據Savitzky-Golay擬合原理及循環總數，確定窗口大小選擇范圍；所述窗口大小選擇范圍為3~N/4范圍內奇數值，其中N為循環總數；

在選擇范圍中依次確定當前窗口大小，針對每個所述當前窗口大小，在所述當前窗口大小對應的每一個滑動平移位置，計算決定系數；以及取所述當前窗口大小中最大的決定系數其對應初始窗口為所述當前窗口大小對應的最優指數區域；

根據每個所述當前窗口大小對應的最優指數區域對應的循環C，確定循環C中的眾數，設為Cz，取Cz對應的滿足決定系數基本閾值的最大當前窗口大小對應的最優指數區域選為目標指數區域；其中，所述滿足決定系數基本閾值具體為滿足決定系數大于0.95；若每個所述當前窗口大小對應的循環C均不同，則取最大決定系數對應的循環C設為Cz，Cz對應的最優指數區域選為目標指數區域；

根據所述目標指數區域確定PCR的指標，其中，所述PCR的指標包括Ct值，所述Cz值即為Ct值。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述PCR的指標還包括初始拷貝數目以及擴增效率；根據所述目標指數區域確定所述PCR的指標的步驟還包括：

根據所述目標指數區域確定初始拷貝數目；

根據所述目標指數區域確定擴增效率。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述根據所述目標指數區域確定初始拷貝數目的步驟，包括：

確定目標指數區域對應的線性擬合截距B₀；

根據公式，計算得到初始拷貝數目X₀。

4.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述根據所述目標指數區域確定擴增效率的步驟，包括：

確定目標指數區域對應的線性擬合斜率K₀；

根據公式，計算得到擴增效率E_n。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述第四數量個循環為所述第三數量個循環中具有3個連續遞增循環中初始循環之后的所有循環。