[發(fā)明專利]一種SalI限制性內(nèi)切酶的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110020913.X
• 申請(qǐng)日: 2021-01-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112813087A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于博文;李建輝;單永超
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海詠科生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/70
• 分類號(hào): C12N15/70;C12N9/22;C12N15/62;C12R1/19
• 代理公司: 上海宛林專利代理事務(wù)所(普通合伙) 31361
• 代理人: 張明

1.一種SalI限制性內(nèi)切酶的制備方法，其特征在于，在原核表達(dá)菌株中同時(shí)表達(dá)SalI和SalIM。

2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述SalIM的DNA及氨基酸序列如SEQ IDNo.1，SEQ ID No.3所示，或者其氨基酸序列與SEQ ID No.3具有至少95％及以上的相似度；所述SalI的DNA及氨基酸序列如SEQ ID No.2，SEQ ID No.4所示，或者其氨基酸序列與SEQID No.4具有至少95％及以上的相似度。

3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述原核表達(dá)菌株包括大腸桿菌。

4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，先在所述原核表達(dá)菌株中轉(zhuǎn)化入含有SalIM的重組質(zhì)粒，使得原核表達(dá)菌株進(jìn)行SalIM基底表達(dá)并進(jìn)行基因組保護(hù)修飾；然后在含有SalIM的重組質(zhì)粒的原核表達(dá)菌株中進(jìn)一步轉(zhuǎn)化入含有SalI的重組質(zhì)粒，獲得含有SalIM的重組質(zhì)粒和含有SalI的重組質(zhì)粒的原核表達(dá)菌株。

5.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，將含有SalIM的重組質(zhì)粒的原核表達(dá)菌株制備成感受態(tài)細(xì)胞，并在所述感受態(tài)細(xì)胞中轉(zhuǎn)化入含有SalI的重組質(zhì)粒。

6.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述含有SalIM的重組質(zhì)粒不含純化標(biāo)簽，所述含有SalI的重組質(zhì)粒帶有純化標(biāo)簽。

7.如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述含有SalIM的重組質(zhì)粒使用pET16b載體，所述含有SalI的重組質(zhì)粒使用pET28a載體。

8.如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，將含有SalIM的重組質(zhì)粒和含有SalI的重組質(zhì)粒的原核表達(dá)菌株進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)后，通過(guò)親和介質(zhì)、離子交換層析和/或凝膠色譜層析進(jìn)行SalI的純化。

9.如權(quán)利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述誘導(dǎo)表達(dá)為，加入終濃度0.5mM的IPTG，在20～23℃下誘導(dǎo)表達(dá)19-22小時(shí)。