[發(fā)明專利]一種秀麗隱桿線蟲對病原細(xì)菌遺忘的動物模型的建立方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202110020119.5 | 申請日： | 2021-01-07 |
| 公開（公告）號： | CN112772560A | 公開（公告）日： | 2021-05-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 鄒偉;王琦;柏樺;張敏 | 申請（專利權(quán)）人： | 昆明醫(yī)科大學(xué) |
| 主分類號： | A01K67/02 | 分類號： | A01K67/02 |
| 代理公司： | 昆明合盛知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 53210 | 代理人： | 牛林濤 |
| 地址： | 650000 云南省昆明*** | 國省代碼： | 云南;53 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 秀麗 線蟲 病原 細(xì)菌 遺忘 動物 模型 建立 方法 | ||
1.一種秀麗隱桿線蟲對病原細(xì)菌遺忘的動物模型的建立方法，其特征在于，具體包括以下步驟：
(1)將秀麗隱桿線蟲進(jìn)行同步化處理，培養(yǎng)至青年?duì)顟B(tài)，將部分線蟲加入到涂滿PA14細(xì)菌平板上訓(xùn)練4h；
(2)訓(xùn)練完成后，將其移入M9培養(yǎng)基中，設(shè)置不同的遺忘時間點(diǎn)，檢測對照組線蟲、PA14訓(xùn)練線蟲、不同時間點(diǎn)產(chǎn)生遺忘線蟲偏好指數(shù)，繪制遺忘曲線；
(3)通過檢測病原處理前、處理時、移除后，線蟲對病原細(xì)菌的偏好指數(shù)的變化和恢復(fù)情況明確遺忘時間。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述秀麗隱桿線蟲對病原細(xì)菌遺忘的動物模型的建立方法，其特征在于：秀麗隱桿線蟲進(jìn)行同步化的具體過程為：
①將保存于固體平板上的線蟲切小塊置于新鮮的OP50平板上，20℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時，平板上出現(xiàn)大量蟲卵即可；
②待平板上出現(xiàn)大量蟲卵后，用M9溶液將線蟲和蟲卵沖洗于14ml的收集管中3000rpm，離心2分鐘；
③離心完后，棄上清液，加入2mL的線蟲裂解液；高速震蕩，邊震蕩邊在顯微鏡下觀察，蟲體破碎釋放出卵即可，隨后加入M9定容至14mL；3000rpm，離心2分鐘；
④離心完后，棄上清，加入M9定容至14mL，3000rpm，離心2分鐘；重復(fù)該步驟4次直至無次氯酸鈉氣味即可；
⑤去除上清后，預(yù)留1mL的M9，用1mL的移液器吹起后移至6mm的培養(yǎng)平板中；最后加入適量M9將蟲卵吹散，放置于20℃培養(yǎng)箱中待孵化。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述秀麗隱桿線蟲對病原細(xì)菌遺忘的動物模型的建立方法，其特征在于：秀麗隱桿線蟲培養(yǎng)至青年?duì)顟B(tài)的培養(yǎng)條件為：
①提前將OP50細(xì)菌活化于LB平板上，挑取單克隆細(xì)菌接種于50ml的LB液體培養(yǎng)基中過夜培養(yǎng)，180rpm，37℃培養(yǎng)18小時；
②將300ml的NGM培養(yǎng)基加熱溶解冷卻后，加入8ml的磷酸鹽緩沖液、300ul硫酸鎂、300ul的氯化鈣和300ul的膽固醇溶液；混勻并倒入直徑為6mm的小平板中吹干；
③在吹干后的平板中加入300-600ul的OP50菌液，并在超凈工作臺中吹干，37℃培養(yǎng)48小時；
④將適量同步化后的L1線蟲加入到培養(yǎng)好的OP50平板上，放入20℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時，即可發(fā)育為young adult的線蟲。
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