[發明專利]新型冠狀病毒抗體檢測試劑盒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110019972.5
• 申請日: 2021-01-07
• 公開（公告）號: CN112379090B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 石曉娟;苗景赟;閆爽
• 申請（專利權）人: 北京百普賽斯生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/68;G01N15/14
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 張德斌;韓蕾

本發明提供一種新型冠狀病毒抗體檢測試劑盒及其制備方法與應用。所述試劑盒包括：IgG結合分子，抗IgM抗體，熒光標記的新型冠狀病毒S1蛋白，熒光標記的新型冠狀病毒N蛋白，S1蛋白的hIgG抗體陽性標準品，N蛋白的hIgG抗體陽性標準品，S1蛋白的hIgM抗體陽性標準品，N蛋白的hIgM抗體陽性標準品，陰性對照hIgG抗體樣品，陰性對照hIgM抗體樣品；其中，所述IgG結合分子與抗IgM抗體負載于不同粒徑的納米顆粒上。本發明的試劑盒用于新型冠狀病毒抗體檢測，可在1?2h內快速完成血清中新型冠狀病毒中和性抗體的檢測，待檢樣品用量少，特異性強，靈敏度高，重復性好，操作簡單，實驗室要求低以及安全性高。

技術領域

本發明是關于一種血清學檢測新型冠狀病毒抗體的方法，具體地說，是關于一種檢測新型冠狀病毒IgG和IgM抗體的熒光免疫檢測試劑盒及其制備方法與應用，屬于細胞生物學和免疫檢驗技術領域。

背景技術

新型冠狀病毒SARS-CoV-2 (2019-nCoV)是2019年新發現的一種病毒，可導致人類病毒性肺炎或肺部感染。它包含四種主要的結構蛋白：刺突蛋白（Spike protein，S蛋白），核衣殼蛋白（Nucleocapsid，N蛋白），膜蛋白（Membrane protein，M蛋白），包膜蛋白（Envelope protein，E蛋白）。S蛋白是冠狀病毒非常重要的表面蛋白，與病毒的傳染能力密切相關，S蛋白包含S1、S2和受體結合域（RBD）。N蛋白在冠狀病毒中含量豐富，是一種高度免疫原性蛋白，參與基因組復制和細胞信號通路調節。被新型冠狀病毒感染后，人體會產生相應的特異性抗體進行防御，其中特異性抗體IgM最早產生并進行早期防御，隨后產生IgG抗體。IgM抗體多在發病3-5天后開始出現陽性，可提示近期感染。IgG抗體是再次免疫應答產生的主要抗體，通常提示病情進入恢復期或存在既往感染。新型冠狀病毒感染的血清學檢測便是通過檢測血液樣本中S蛋白和N蛋白的特異性抗體IgM和IgG的存在及含量，來間接判斷體內有無病毒及病毒感染情況。目前，在國家衛生健康委員會已發布的《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》中也明確提出：在原有診療方案的基礎上增加了血清學檢測，作為確診病例和疑似病例的診斷依據之一。

此外，在新型冠狀病毒疫苗的評估過程中，因疫苗本身的限制，并不能百分之百保護接種者（臨床保護數據：Moderna mRNA疫苗 94.5%，BioNtech mRNA疫苗 95%，阿斯利康腺病毒疫苗62%-90%），對于疫苗本身的效價，以及疫苗接種后的保護效力，都有必要進行評估。對于SARS-CoV-2而言，直接針對S蛋白的中和抗體才能夠中和病毒的毒力、阻止病毒對機體的感染。但是這并不意味著針對其他部分的抗體無效，包含N蛋白或者其他非結構蛋白的疫苗抗原也許可以誘導機體產生更為均衡的體液免疫和T細胞免疫應答。因此接種疫苗后，血清中S蛋白和N蛋白的特異性抗體IgM和IgG的存在和滴度也是新型冠狀疫苗評估指標之一。

目前用于血清學檢測新型冠狀病毒抗體的方法包括酶聯免疫法（ELISA）、膠體金免疫層析法法、S-Flow流式檢測和熒光素酶免疫沉淀法。ELISA法操作簡單且較為常見，此方法靈敏度相對高，載體標準化難度較低，但是檢測速度慢、易污染、步驟較為繁瑣。膠體金法特點是無需特殊處理標本，操作簡單，用時短，無需檢測儀器，對檢測技術對人員、場所的限制較低，可廣泛應用于基層醫療單位及現場檢測，然而膠體金法對結果的確定只能是定性檢測，無法定量，也無法進行抗體滴度比較。S-Flow流式檢測是基于過表達S蛋白的293T細胞株建立的，受細胞培養條件和細胞狀態的限制，并且只能檢測S蛋白的抗體，無法同時兼顧N蛋白抗體的檢測。熒光素酶免疫沉淀法是將熒光素酶偶聯在S蛋白或N蛋白上，抗體與蛋白結合后，再通過能夠與抗體Fc段結合的磁珠將熒光素酶-S蛋白或N蛋白-抗體復合物沉淀下來，使用熒光素酶底物顯色試劑盒進行顯色檢測，此方法操作繁瑣，而且檢測靈敏度較ELISA和S-Flow低。

因此，關于新型冠狀病毒IgG和IgM抗體檢測分析方法仍需進一步研發。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種檢測新型冠狀病毒IgG和IgM抗體的試劑盒。