[發明專利]新型冠狀病毒抗體檢測試劑盒及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202110019972.5
• 申請日: 2021-01-07
• 公開（公告）號: CN112379090B
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 石曉娟;苗景赟;閆爽
• 申請（專利權）人: 北京百普賽斯生物科技股份有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/68;G01N15/14
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司 11127
• 代理人: 張德斌;韓蕾

1.一種流式檢測新型冠狀病毒抗體的熒光免疫檢測試劑盒，該試劑盒包括：

IgG結合分子，抗 IgM 抗體，熒光標記的新型冠狀病毒S1蛋白，熒光標記的新型冠狀病毒N蛋白，S1蛋白的 hIgG 抗體陽性標準品，N蛋白的 hIgG 抗體陽性標準品，S1蛋白的hIgM 抗體陽性標準品，N蛋白的 hIgM抗體陽性標準品，陰性對照 hIgG 抗體樣品，陰性對照 hIgM 抗體樣品；

其中，所述IgG結合分子負載于第一納米顆粒上，所述抗IgM抗體負載于第二納米顆粒上，所述第一納米顆粒與第二納米顆粒粒徑不同。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述第一納米顆粒、第二納米顆粒各自獨立地為非磁性納米顆?；虼判约{米顆粒，各納米顆粒粒徑1-30μm，并且，第一納米顆粒與第二納米顆粒的粒徑差為2-20μm。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述IgG結合分子為Protein G、Protein A、Protein L或抗IgG的抗體；所述抗IgM抗體為抗人源 IgM 的鼠源單克隆抗體或抗IgM的其他種屬單克隆抗體或多克隆抗體。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其中，所述熒光標記的新型冠狀病毒S1蛋白為熒光標記的新型冠狀病毒S-trimer蛋白或熒光標記的新型冠狀病毒S1蛋白的RBD。

5.根據權利要求1或4所述的試劑盒，其中，所述熒光標記的新型冠狀病毒S1蛋白所用的熒光染料包括PE、FITC、APC或Alexa Flour染料中的一種或多種；熒光標記的新型冠狀病毒N蛋白中所用的熒光染料為FITC、PE、APC或 Alexa Flour中的一種或多種。

6.根據權利要求5所述的試劑盒，其中，所述熒光標記的新型冠狀病毒S1蛋白為PE標記的新型冠狀病毒S1蛋白；熒光標記的新型冠狀病毒N蛋白為FITC標記的新型冠狀病毒N蛋白。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其中：

S1蛋白的 hIgG抗體陽性標準品，為抗新型冠狀病毒S1蛋白的人IgG1亞型單克隆抗體，或為抗新型冠狀病毒S1蛋白人源IgG型多克隆抗體；

N蛋白的 hIgG抗體陽性標準品，為抗新型冠狀病毒N蛋白的人IgG1亞型單克隆抗體，或為抗新型冠狀病毒N蛋白人源IgG型多克隆抗體；

S1蛋白的 hIgM 抗體陽性標準品， 為抗新型冠狀病毒S1蛋白的人IgM亞型單克隆抗體，或為抗新型冠狀病毒S1蛋白人源IgM型多克隆抗體；

N蛋白的 hIgM抗體陽性標準品，為抗新型冠狀病毒N蛋白的人IgM亞型單克隆抗體，或為抗新型冠狀病毒N蛋白人源IgG型多克隆抗體；

陰性對照 hIgG 抗體樣品，為與新型冠狀病毒S1蛋白和新型冠狀病毒N蛋白無結合的人源免疫球蛋白IgG；

陰性對照 hIgM 抗體樣品，為與新型冠狀病毒S1蛋白和N蛋白無結合的人源免疫球蛋白IgM；

所述試劑盒還包括最低檢出限參考品，其為8~20份不同發病時間的新型冠狀病毒IgG和IgM抗體陽性血清樣本滅活后混合得到的，檢測時按照比例稀釋使用。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其中還包括流式檢測緩沖液，所述流式檢測緩沖液為含有0.5-2% BSA蛋白的0.01M磷酸鹽緩沖液，pH7.4。

9.根據權利要求1所述的試劑盒，該試劑盒用于同時檢測新型冠狀病毒S1蛋白和N蛋白的IgG和IgM抗體。

10.一種利用權利要求1~9任一項所述的試劑盒進行非診斷目的的流式檢測新型冠狀病毒抗體的檢測方法，其包括：

分別取負載IgG結合分子的納米顆粒和負載抗 IgM 抗體的納米顆粒加入反應管內，加入流式檢測緩沖液洗滌，加入熒光標記的新型冠病毒S1蛋白、熒光標記的新型冠狀病毒N蛋白和待測樣品，于4℃孵育20min~1h；用流式檢測緩沖液洗滌后，加入PBS液重懸細胞，進行流式檢測。