[發明專利]一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法

有效

• 申請號: 202110014104.8
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112675299B
• 公開（公告）日: 2023-10-20
• 發明（設計）人: 李山峰;張越;王東升;張洪楠;高亞東;尹建華
• 申請（專利權）人: 黑龍江省百洲生物工程有限公司
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K39/12;A61P31/14;A61P19/06;C12N7/00;C12N7/06;C12R1/93
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

本發明公開了一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法，屬于獸用生物制品技術領域。本發明公開的一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法，包括病毒增殖與病毒液滅活、制備滅活疫苗。本發明制備的新型鵝星狀病毒滅活疫苗，疫苗接種后，沒有出現任何局部和全身的不良反應，并且各項指標檢測均穩定有效；利用本發明研制的滅活疫苗對雛鵝進行免疫后，雛鵝可以快速獲得免疫保護，有效降低雛鵝感染致死率，為鵝群提供高效的免疫護航。

技術領域

本發明涉及獸用生物制品技術領域，更具體的說是涉及一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法。

背景技術

2017年以來，黑龍江、遼寧以及中東部地區4-25日齡雛鵝群爆發了一種嚴重的傳染性疾病，其特征為痛風，臨床表現為精神沉郁甚至死亡，該病主要發生于5-20日齡的雛鵝，死亡率最高可達50％。患病雛鵝體腔及關節發生嚴重尿酸鹽沉積，臥地倦動，采食困難，造成雛鵝生長緩慢，料肉比升高，肉鵝出欄合格率顯著降低，對肉鵝養殖業造成嚴重經濟損失。

經研究發現，該病的爆發是由鵝星狀病毒感染所致，目前尚無疫苗可以預防，常規的抗病毒和抗菌治療方法無效。相對于弱毒疫苗的開發，滅活疫苗具有更高的安全性。但是傳統滅活疫苗保護性抗體產生需要2-3周，周期較長，而雛鵝痛風主要發生在20日齡以內，尤其是10日齡左右，疫苗未產生有效保護，鵝群已經發病，不能滿足雛鵝的免疫需求。

因此，提供一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法是本領域技術人員亟需解決的問題。

發明內容

有鑒于此，本發明提供了一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法，該疫苗能夠使雛鵝快速產生抗體，縮短免疫空白期，預防雛鵝星狀病毒引起的鵝痛風，從而減少該疾病造成的經濟損失。

為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種防控鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗的制備方法，具體步驟如下：

(1)將黃芪甲苷、CPG核酸、維生素A、維生素E按比例添加到滅活鵝星狀病毒液中，添加吐溫-80，搖勻后添加25％w/v蜂膠乙醇溶液，搖勻，獲得水相；每毫升水相中包含黃芪甲苷100μg-200μg，CPG核酸10μg-1mg，維生素A10mg-30mg，維生素E10mg-30mg；所述水相中Tween-80的占比為4％-6％；所述水相中25％w/v蜂膠乙醇溶液的占比為5％-20％；

(2)將白油、硬脂酸鋁和司本-80按96：1：4的比例混合，獲得油相；

(3)將步驟(1)獲得的水相和步驟(2)獲得的油相按1：1-1.5混勻乳化，獲得鵝星狀病毒復合佐劑滅活疫苗。

CpG核酸是含非甲基化CpG基序的寡聚脫氧核苷酸(OligodeoxynucleotidescontainingCpG motifs)，未甲基化的CpG ODN被機體通過TLR9(Toll-like receptor 9)識別后，通過一系列信號級聯轉導，觸發機體防御機制，引起明顯及多樣化的免疫反應，包括血循環系統中的補體激活、通過分泌產生IL-12、TNF-α、IFN-α/β和IFN-γ等細胞因子，調控Th1/Th2免疫應答；間接活化NK細胞和T細胞，增強細胞因子的分泌，增強疫苗特異性的體液免疫和細胞免疫反應；活化DC、巨噬細胞和B細胞，繼而提升機體的免疫應答。作為TLR9激動劑，機體對其刺激產生的促細胞免疫和體液免疫應答讓其成為應用于多種預防性或治療性疫苗的新型佐劑。

黃芪甲苷為中藥黃芪的主要活性成分之一，國內外對其藥理作用機制以及安全性等進行了一些研究。由于黃芪甲苷具有保護心血管、促進神經干細胞增殖、增強機體免疫功能、抗炎、抗衰老等多方面的生物學功能；在體內和體外均可增加T/B淋巴細胞的增殖與抗體的產生，并且效果優于黃芪多糖。因此可以作為免疫佐劑使用，不但可以提高細胞以及體液免疫，也可以提高機體抗病毒能力。