[發明專利]一種肺癌基因突變位點的檢測方法及其試劑盒

在審

• 申請號: 202110012620.7
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112899365A
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 尚午;張毅良
• 申請（專利權）人: 南京普濟生物有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種肺癌基因突變位點的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法包括：

步驟一、制備得到數字PCR混合液；其中，所述數字PCR混合液不包含三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸，所述數字PCR使用的引物包含三維結構，所述數字PCR使用的引物包含不少于十三個堿基的核酸序列N；所述數字PCR使用的引物包含如下核酸序列：GGGUUGGGAAGAAACUGUGGCACUUCGGUGCCAGCAACCC；

將所述數字PCR使用的引物進行預處理，所述預處理方法包括：將所述數字PCR使用的引物加入到緩沖液中加熱至65~85℃，保溫5~10分鐘，然后冷卻至0~40℃，保溫20~30分鐘；

步驟二、用數字PCR混合液制作PCR微反應單元，再進行PCR擴增反應，得到PCR擴增反應后的產物；

步驟三、對所述PCR擴增反應后的產物進行信號收集，根據熒光信號的類型判斷待測樣品中是否含有目標基因的位點突變的DNA模板及其數量和含量。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述緩沖液的組分為：300±5 mMNaCl，4.5±1 mM MgCl₂，20±5 mM Tris (pH 7.6)。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，所述核酸序列N只由堿基A、T和G組成。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟二所述數字PCR可在至少2個反應體系中擴增至少99重位點。

5.一種肺癌基因突變位點的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒通過數字PCR完成肺癌基因突變位點的檢測，所述檢測試劑盒使用的引物包含不少于十三個堿基的特殊核酸序列N，所述特殊核酸序列N只由堿基A、T和G組成。

6.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒使用的反應液不包含三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸組分。

7.根據權利要求5所述的檢測試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒可在至少2個反應體系中使用至少99對引物，同時進行目標序列的檢測。

8.一種根據權利要求1至4任一權項所述的檢測方法在生物或醫藥領域的應用。

9.一種根據權利要求5至7任一權項所述的檢測試劑盒在生物或醫藥領域的應用。