[發明專利]一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法

有效

• 申請號: 202110012473.3
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112697761B
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發明（設計）人: 陳全勝;張運蓮;李歡歡;劉蕊;歐陽琴
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：上轉換熒光納米材料的制備：

將稀土氯化物、氯化鈉以及聚乙烯亞胺加入到乙二醇劇烈攪拌溶解，稀土氯化物包括六水氯化釔、六水氯化鐿、六水氯化鈥和六水氯化鉺；然后再次向混合液中加入含氟化銨的乙二醇溶液，劇烈攪拌至溶液均一透明；反應液轉移至反應釜中密封加熱；冷卻后用乙醇和水的混合液對反應產物清洗，真空干燥得到上轉換熒光納米材料；

步驟二，熒光納米探針的制備：將一步合成法得到的上轉換熒光納米材料溶解于緩沖溶液中，通過戊二醛交聯法，將卡那霉素適配體與上轉換熒光納米材料連接起來；

步驟三，特異性檢測體系的構建：將卡那霉素適配體與上轉換熒光納米材料的耦合物分散在緩沖液中，然后加入與卡那霉素適配體互補鏈連接的BHQ3溶液，孵育，通過堿基互補配對原則形成上轉換/卡那霉素適配體/適配體互補鏈/BHQ3復合物；

步驟四，卡那霉素檢測標準曲線的建立：分別將不同濃度的卡那霉素溶液依次加入到特異性檢測體系中，測定特異性檢測體系的熒光強度信號特征值Y，建立卡那霉素濃度c與熒光強度信號特征值Y的關系，即得到卡那霉素檢測標準曲線；

步驟五，牛奶中卡那霉素的檢測：向牛奶樣品中加入乙腈，沉淀蛋白之后，離心，去掉上層脂肪和下層沉淀，再用緩沖溶液稀釋，加入到特異性檢測體系中，測定特異性檢測體系的熒光強度信號特征值，通過所構建的卡那霉素檢測標準曲線，計算出牛奶中卡那霉素的含量。

2.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟二中，所述上轉換熒光納米材料溶液濃度為1mg·ml^-1；上轉換熒光納米材料溶液與25％戊二醛的用量比為10ml：1.25ml；孵育時間為2h。

3.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟二中，加入的卡那霉素適配體的量為0.5OD，孵育時間為12h。

4.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟二中，所述緩沖液為PBS緩沖液，pH為7.4。

5.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟三中，卡那霉素適配體與上轉換熒光納米材料的耦合物和BHQ3溶液互補鏈用量比為10ml：0.8ml，所述BHQ3溶液互補鏈濃度為1OD·ml^-1，孵育時間為40min。

6.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟四中，所述卡那霉素溶液的終濃度范圍0.5-50μM；特異性檢測體系總體積為1ml。

7.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟四中，測定特異性檢測體系的熒光強度信號特征值Y為：具體是測定980nm激發光激發下654nm處的熒光強度值為檢測溶液的熒光強度信號特征值。

8.根據權利要求1所述的一種基于上轉換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測方法，其特征在于，步驟五中，牛奶樣品與乙腈的用量比1：1，離心轉速為7000rpm，時間為10min；最終檢測終體積為1ml。