[發(fā)明專利]一種基于上轉(zhuǎn)換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110012473.3
• 申請(qǐng)日: 2021-01-06
• 公開（公告）號(hào): CN112697761B
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳全勝;張運(yùn)蓮;李歡歡;劉蕊;歐陽琴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
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• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種基于上轉(zhuǎn)換、BHQ3特異性體系的牛奶中卡那霉素含量檢測(cè)方法，屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，以六水氯化釔、六水氯化鐿、六水氯化鉺、聚乙烯亞胺、氯化鈉和氟化銨的乙二醇混合液為原料，制備上轉(zhuǎn)換熒光納米材料；通過戊二醛交聯(lián)法將上轉(zhuǎn)換材料與卡那霉素適配體連接起來；與卡那霉素適配體互補(bǔ)鏈?BHQ3溶液混合孵育，得到特異性檢測(cè)體系；加入卡那霉素溶液后，測(cè)定檢測(cè)溶液的熒光強(qiáng)度信號(hào)特征值為縱坐標(biāo)，以卡那霉素濃度為橫坐標(biāo)，建立卡那霉素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，實(shí)現(xiàn)待測(cè)牛奶中卡那霉素含量的測(cè)定；本發(fā)明通過構(gòu)建穩(wěn)態(tài)特異性卡那霉素?zé)晒鈾z測(cè)體系，實(shí)現(xiàn)牛奶中卡那霉素的高靈敏、特異性檢測(cè)，具有較寬的線性檢測(cè)范圍和較低的檢測(cè)限。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于食品安全檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)計(jì)一種基于上轉(zhuǎn)換熒光與BHQ3猝滅劑對(duì)食品中卡那霉素含量的檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

卡那霉素是一種氨基糖苷類抗生素，通過與30S核糖體結(jié)合從而致使mRNA密碼誤讀,從而抑制蛋白質(zhì)的合成?？敲顾貙?duì)某些微生物的生長(zhǎng)和存活有很大的抑制作用，可以用來治療有革蘭氏革蘭氏陽性菌和陰性菌引起的感染，被廣泛用于食品生產(chǎn)和畜牧業(yè)。與此同時(shí)，卡那霉素的不合理使用會(huì)導(dǎo)致在肉類、牛奶和其他動(dòng)物性食品中殘留，然后通過食物鏈進(jìn)入人體,可對(duì)人體產(chǎn)生極大的毒性，包括腎毒性、抗生素耐藥性、神經(jīng)肌肉阻滯作用和過敏反應(yīng)等。為保護(hù)人類健康，歐盟規(guī)定牛奶中卡那霉素的最大允許殘留量不超過150μg/kg,最近，中國(guó)頒布的標(biāo)準(zhǔn)是牛奶中卡那霉素的最大允許殘留量不超過200μg/kg.傳統(tǒng)的檢測(cè)方法例如氣相色譜，高效液相色譜法，液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法，酶聯(lián)免疫法,毛細(xì)管電泳法等，雖然這些方法都是穩(wěn)定可靠的，具有足夠的精確性，但大多都存在耗時(shí)長(zhǎng)，樣品預(yù)處理繁瑣，成本高等缺點(diǎn)，不能滿足卡那霉素的實(shí)時(shí)快速檢測(cè)要求。本發(fā)明提出了一種快速準(zhǔn)確的卡那霉素檢測(cè)方法，克服傳統(tǒng)方法的不足，提高卡那霉素檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)中存在的不足，如：檢測(cè)成本高、時(shí)間長(zhǎng)、預(yù)處理和檢測(cè)步驟繁瑣等，本發(fā)明提供了一種食品中卡那霉素的上轉(zhuǎn)換熒光檢測(cè)方法，通過納米可控自組裝制備熒光供體，構(gòu)建穩(wěn)態(tài)特異性卡那霉素的檢測(cè)體系，消除背景熒光、其他因素干擾的影響，實(shí)現(xiàn)食品中卡那霉素的低成本、高靈敏和特異性檢測(cè)。

為實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：

步驟一，上轉(zhuǎn)換熒光納米材料的制備：將稀土氯化物(六水氯化釔、六水氯化鐿、六水氯化鈥和六水氯化鉺)氯化鈉以及聚乙烯亞胺加入到乙二醇劇烈攪拌溶解；然后再次向混合液中加入含氟化銨的乙二醇溶液，劇烈攪拌至溶液均一透明；反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至反應(yīng)釜中密封加熱；冷卻后用乙醇和水的混合液對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物清洗，真空干燥得到上轉(zhuǎn)換熒光納米材料。

步驟二，熒光納米探針的制備：將一步合成法得到的上轉(zhuǎn)換熒光納米材料溶解于緩沖溶液中，通過戊二醛交聯(lián)法，將卡那霉素適配體與上轉(zhuǎn)換熒光納米材料連接起來。

步驟三，特異性檢測(cè)體系的構(gòu)建：將卡那霉素適配體與上轉(zhuǎn)換材料的耦合物分散在緩沖液中，然后加入與卡那霉素適配體互補(bǔ)鏈連接的BHQ3溶液，孵育，通過堿基互補(bǔ)配對(duì)原則形成上轉(zhuǎn)換/卡那霉素適配體/適配體互補(bǔ)鏈/BHQ3復(fù)合物。

步驟四，卡那霉素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：分別將不同濃度的卡那霉素溶液依次加入到特異性檢測(cè)體系中，測(cè)定特異性檢測(cè)體系的熒光強(qiáng)度信號(hào)特征值Y，建立卡那霉素濃度c與熒光強(qiáng)度信號(hào)特征值Y的關(guān)系，即得到卡那霉素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線。

步驟五，牛奶中卡那霉素的檢測(cè)：向牛奶樣品中加入乙腈，沉淀蛋白之后，離心，去掉上層脂肪和下層沉淀，再用緩沖溶液稀釋，加入到特異性檢測(cè)體系中，測(cè)定特異性檢測(cè)體系的熒光強(qiáng)度信號(hào)特征值，通過所構(gòu)建的卡那霉素檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算出食品樣本中卡那霉素的含量。