[發(fā)明專利]一種高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202110011525.5
• 申請日: 2021-01-06
• 公開（公告）號: CN112646738A
• 公開（公告）日: 2021-04-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 許正宏;史勁松;徐國強(qiáng);高宇豪;徐建國;付靜;曹崢;吳勇杰
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/52;C12N15/54;C12N15/81;C12N15/66;C12P21/02;C07K5/037;C12R1/84
• 代理公司: 無錫承果知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32373
• 代理人: 張婷婷

1.一種高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA，其特征在于：以畢赤酵母為宿主，異源表達(dá)來源于釀酒酵母的谷胱甘肽合成酶Scgsh1和Scgsh2基因及腺苷激酶Scadk1基因，獲得的工程菌命名為畢赤酵母菌株G3-SA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA，其特征在于：所述畢赤酵母選用畢赤酵母Pichia pastoris GS115。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA，其特征在于：所述谷胱甘肽合成酶Scgsh1和Scgsh2基因、所述腺苷激酶Scadk1基因的核苷酸序列分別如SEQ.NO.01～SEQ.NO.03所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA的構(gòu)建方法，其特征在于：以畢赤酵母為宿主，首先異源表達(dá)來源于釀酒酵母的谷胱甘肽合成酶Scgsh1、Scgsh2基因，獲得的工程菌命名為G3；再以G3為宿主，異源表達(dá)來源于釀酒酵母的腺苷激酶Scadk1基因，獲得的工程菌命名為畢赤酵母菌株G3-SA。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA的構(gòu)建方法，其特征在于：具體方法為以pGAPZA為初始質(zhì)粒，采用BglⅡ與BamHⅠ酶切，并將插入了XbaⅠ的片段插入其中，所構(gòu)質(zhì)粒命名為pGAPZT；在pGAPZT的BglⅡ與XbaⅠ之間插入P_AOX1序列；Scadk1基因經(jīng)S.cerevisiae BY4741基因組PCR擴(kuò)增后獲取，所得片段連接在pGAPZT中并用SacⅠ線性化電轉(zhuǎn)至G3菌株中，所得菌株經(jīng)含有2mg/L Zeocin的YPD平板篩選后，所得菌株名為G3-SA。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA的構(gòu)建方法，其特征在于：所述腺苷激酶Scadk1基因的異源表達(dá)的發(fā)酵過程中，在發(fā)酵時間15-16h時外源添加4g/L的檸檬酸鈉。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA的構(gòu)建方法過程中得到的質(zhì)粒。

8.編碼如權(quán)利要求1-3任一所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA的基因。

9.一種制備谷胱甘肽的方法，采用如權(quán)利要求1-3任一所述的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA，或如權(quán)利要求4-6任一所述方法構(gòu)建的高產(chǎn)谷胱甘肽畢赤酵母菌株G3-SA，通過發(fā)酵方法合成谷胱甘肽。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述方法制備得到的谷胱甘肽。