[發明專利]一種山茱萸籽多糖的分離純化方法

在審

• 申請號: 202110009280.2
• 申請日: 2021-01-05
• 公開（公告）號: CN112608395A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發明（設計）人: 白新鵬;何坤明
• 申請（專利權）人: 海南大學
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 海南盛億專利代理事務所(普通合伙) 46005
• 代理人: 陳景帥

本發明公開了一種山茱萸籽多糖的分離純化方法。本發明首次對山茱萸籽多糖進行了分離純化，首先對山茱萸籽多糖進行脫色、脫蛋白處理，然后利用陰離子交換柱層析進行初步分離純化，葡聚糖凝膠柱層析進一步分離純化，從而得到純度較高的山茱萸籽多糖組分，為進一步探討山茱萸籽多糖結構及其生物活性奠定技術基礎，也為山茱萸籽產業帶來更大的經濟效益。

技術領域

本發明涉及中藥提取技術領域，具體涉及一種山茱萸籽多糖的分離純化方法。

背景技術

山茱萸(Fructus Corni)為山茱萸科植物山茱萸的干燥果肉，又名山萸肉、藥棗、肉棗等,臨床上以除去種子的成熟果實入藥，其味酸、澀、微溫,歸肝腎經，有補益肝腎、澀精固脫的功效，是我國傳統的中藥材，也是中醫常用的名貴藥材之一。中醫藥臨床研究證明，山茱萸是治療糖尿病、冠心病和高血壓病的主要藥材。現代研究表明，山茱萸具有增強免疫系統功能、抗炎抑菌、降血糖、抗休克、抗氧化、抗腫瘤等作用。山茱萸中含有豐富的多糖類成分，藥理研究顯示，山茱萸多糖是其中一類主要活性成分；果肉中主要成分有糖類、有機酸類及其酯類、鞣質類等。多糖類物質是生命代謝不可缺少的重要物質,具有多種生物活性，多糖的分離純化是研究多糖結構和活性的基礎，只有得到相對純度較高的多糖組分，才能更好地分析其結構，從而探究其重要的生理功能，因此多糖類物質為當今生物醫藥研究和開發的一大熱點。

目前國內外對山茱萸的研究主要集中在化學成分及藥理作用方面，其主要成分為環烯醚萜苷類、五環三萜酸及其酯類、鞣質類、揮發油類及多糖類等，具有免疫調節、降低血糖、抗休克、抗心律失常、抗菌、抗炎、抗衰老、抗癌、抗艾滋病和治療不育癥等藥理活性。

山茱萸籽是山茱萸果實留下的果仁，富含多糖、蛋白質和油脂等成分。山茱萸籽目前的研究僅限于山茱萸籽油、栲膠，山茱萸籽多糖尚無人研究，而山茱萸籽中的糖類物質相當豐富，大量的山茱萸籽中的糖類物質未得到合理的利用，造成植物多糖資源的浪費。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種山茱萸籽多糖的分離純化方法。

本發明的目的通過以下技術方案來實現：一種山茱萸籽多糖的分離純化方法，它包括以下步驟：

S1.脫色：將山茱萸籽粗多糖溶液中加入雙氧水，并調節溶液的pH值至8-9，在35-45℃的水浴中脫色0.5-1.5h，脫色后離心得澄清粗多糖溶液；

S2.脫蛋白：將澄清粗多糖溶液中加入Sevage試劑，劇烈震蕩15-25min后移入分液漏斗中靜置，棄取中間層和下層，多次重復至分液漏斗中無明顯的中間蛋白層；將上層的濃縮多糖溶液用透析袋透析除去鹽類及小分子雜質，得無蛋白的山茱萸籽多糖；

S3.陰離子交換柱層析：采用DEAE-52纖維素柱對無蛋白的山茱萸籽多糖進行分離純化,分別用蒸餾水、0.1mol/L、0.2mol/L、0.3mol/L、0.4mol/L和0.5mol/LNaCl溶液以1.0mL/min的流速逐步洗脫，收集吸收峰洗脫液；

S4.葡聚糖凝膠柱層析：采用Sephadex G-100柱對步驟S3中的吸收峰洗脫液進一步分離純化，用蒸餾水以流速0.4mL/min洗脫，收集吸收峰洗脫液，并將洗脫液后處理得高純度的山茱萸籽多糖。

進一步地，步驟S1中所述雙氧水的質量百分比濃度為30％。

進一步地，步驟S1中用氫氧化鈉調節溶液的pH值。

進一步地，步驟S1中所述離心的轉速為5000-7000r/min，離心時間為3-7min。

進一步地，步驟S2中所述Sevage試劑中氯仿與正丁醇的體積比為4:1。

進一步地，步驟S2中所述透析時間為45-50h，并間隔12h更換一次蒸餾水。