[發明專利]一種鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110008346.6
• 申請日: 2021-01-05
• 公開（公告）號: CN112641936B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 王桂軍;朱英奇;李佳明;呂炫;張沖;張淼;張瑞辰;王蓓;曹守林
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K9/127;C07K14/08;C12N15/70;A61P31/14;A61P19/06;C12R1/19
• 代理公司: 合肥信誠兆佳知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34159
• 代理人: 崇鑫

1.一種鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗，其特征在于，包括：脂質體，以及結合或包裹于脂質體中的VP27蛋白；

脂質體由卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑按薄膜擴散法制得，其中抗氧化劑為維生素E、維生素A、維生素C中至少一種。

2.一種如權利要求1所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

S1、將卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑混合，溶于有機溶劑中，減壓旋蒸除去有機溶劑，得到膜狀空白脂質體，其中有機溶劑為乙醇、乙醚、氯仿中至少一種；

S2、向膜狀空白脂質體中加入pH值為7.3-7.5的磷酸鹽緩沖液和玻璃珠，水平搖床進行水化得到混懸液；

S3、將混懸液分離，加入VP27蛋白溶液，超聲處理得到鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗。

3.根據權利要求2所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，S1中，卵磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰膽堿中至少一種；

S1中，卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑的質量比為1.5-2.5：0.8-1.2：0.06-0.14。

4.根據權利要求2所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，S2的水化過程中，水化溫度為36-38℃，搖床轉速為180-220r/min，水化時間為0.8-1.2h。

5.根據權利要求2所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，S3的超聲處理過程中，超聲功率為950-1050w，其中每工作5s間歇5s為1個周期，每60個超聲處理周期后停止1min，超聲處理總時間為32min。

6.根據權利要求2所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，S3的超聲處理過程中保持冰浴，超聲結束后除菌過濾。

7.根據權利要求2所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，S3中，VP27蛋白溶液采用如下工藝制備：將鵝星狀病毒接種于病毒培養基中培養48-72h，提取RNA，反轉錄，PCR擴增獲得VP27基因；將VP27基因和pCold質粒分別雙酶切后連接，轉化至大腸桿菌Rosetta中，低溫誘導表達，純化得到VP27蛋白溶液。

8.根據權利要求2所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，其特征在于，S3中，加入VP27蛋白溶液后，向體系中加入蛋白酶抑制劑，然后進行超聲處理；

蛋白酶抑制劑為抑肽酶、亮抑蛋白酶肽、EDTA中至少一種，蛋白酶抑制劑在體系中濃度為1.5-2.5μg/mL。

9.如權利要求1所述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗在制備預防或治療雛鵝痛風病的藥物中的應用。