[發明專利]一種鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202110008346.6
• 申請日: 2021-01-05
• 公開（公告）號: CN112641936B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發明（設計）人: 王桂軍;朱英奇;李佳明;呂炫;張沖;張淼;張瑞辰;王蓓;曹守林
• 申請（專利權）人: 安徽農業大學
• 主分類號: A61K39/12
• 分類號: A61K39/12;A61K9/127;C07K14/08;C12N15/70;A61P31/14;A61P19/06;C12R1/19
• 代理公司: 合肥信誠兆佳知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 34159
• 代理人: 崇鑫

本發明公開了一種鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗，包括：脂質體，以及結合或包裹于脂質體中的VP27蛋白；脂質體由卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑按薄膜擴散法制得。本發明還公開了上述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，包括如下步驟：將卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑混合，溶于有機溶劑中，減壓旋蒸除去有機溶劑，得到膜狀空白脂質體；向膜狀空白脂質體中加入磷酸鹽緩沖液和玻璃珠，水平搖床進行水化得到混懸液；將混懸液分離，加入VP27蛋白溶液，超聲處理得到鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗。本發明還公開了上述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗在制備預防或治療雛鵝痛風病的藥物中的應用。

技術領域

本發明涉及動物疫苗技術領域，尤其涉及一種鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗及其制備方法和應用。

背景技術

疫苗是預防和控制傳染病最有效、最經濟的手段，可追溯至最早應用于接種的牛痘，發展至今已有多種多樣的疫苗。目前疫苗在禽類養殖生產中的應用已然是不可或缺的。傳統疫苗包括滅活疫苗和弱毒疫苗，主要是通過滅活或減毒病原體來制備疫苗，但滅活或減毒的病原體，因為其成分比較復雜，并存在毒力返強等問題，所以其安全性一直讓人擔憂。而新型亞單位疫苗存在免疫原性弱、穩定性差、細胞微環境中易降解等問題，利用合適的遞呈載體可以很好的解決這個問題。

鵝星狀病毒是引起鵝痛風病的一個重要病原。鵝痛風病常在春、秋季暴發，臨床表現為排泄白色或綠色稀便，關節出現腫大并伴有尿酸鹽沉積和癱瘓。尸檢時，在膽囊、關節剖面、輸尿管和心、肝、氣囊、氣管、腺胃的表面以及膽汁內發現尿酸鹽沉積，腎臟腫大發白。該病歷時7-10d，發病率高達80-90％，若不及時治療，死亡率可達20-70％。

目前雛鵝痛風病對鵝的養殖生產造成了巨大的影響，但尚無有效的商品化疫苗預防鵝星狀病毒的感染。

發明內容

基于背景技術存在的技術問題，本發明的目的是通過原核表達技術，表達鵝星狀病毒的主要抗原決定簇蛋白——鵝星狀病毒纖突蛋白，鵝星狀病毒纖突蛋白能刺激機體產生具有中和活性的抗體，從而達到保護雛鵝免受鵝星狀病毒感染，為預防雛鵝痛風病帶來了新的方法。

由于脂質體作為一種新型疫苗佐劑，是由非免疫原性、無毒性和可生物降解的磷脂組成的能夠包裹抗原的類脂小球，非常適合作為遞呈亞單位疫苗的工具，具有安全、耐受、緩釋抗原等優點，本發明利用基因工程方法表達具有免疫原性的鵝星狀病毒囊膜蛋白(VP27蛋白)，采用薄膜擴散法制備空白脂質體，利用超聲法將VP27蛋白包被在脂質體雙分子層中。具體如下：

一種鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗，包括：脂質體，以及結合或包裹于脂質體中的VP27蛋白；

脂質體由卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑按薄膜擴散法制得。

上述鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗制備方法，包括如下步驟：

S1、將卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑混合，溶于有機溶劑中，減壓旋蒸除去有機溶劑，得到膜狀空白脂質體；

S2、向膜狀空白脂質體中加入磷酸鹽緩沖液和玻璃珠，水平搖床進行水化得到混懸液；

S3、將混懸液分離，加入VP27蛋白溶液，超聲處理得到鵝星狀病毒纖突蛋白脂質體疫苗。

優選地，S1中，卵磷脂為大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二油酰基卵磷脂、二油酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰膽堿中至少一種，抗氧化劑為維生素E、維生素A、維生素C中至少一種，有機溶劑為乙醇、乙醚、氯仿中至少一種。

優選地，S1中，卵磷脂、膽固醇、抗氧化劑的質量比為1.5-2.5：0.8-1.2：0.06-0.14。

優選地，S2中，磷酸鹽緩沖液的pH值為7.3-7.5。

優選地，S2的水化過程中，水化溫度為36-38℃，搖床轉速為180-220r/min，水化時間為0.8-1.2h。