[發明專利]一種運用數字PCR進行胎兒分數檢測的方法及其試劑盒在審
| 申請號： | 202110007527.7 | 申請日： | 2021-01-05 |
| 公開（公告）號： | CN112899357A | 公開（公告）日： | 2021-06-04 |
| 發明（設計）人： | 尚午;王友祥;楊志劼 | 申請（專利權）人： | 南京普濟生物有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6883 | 分類號： | C12Q1/6883;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 210008 江蘇省南京市江北新區新錦湖路*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 運用 數字 pcr 進行 胎兒 分數 檢測 方法 及其 試劑盒 | ||
1.一種運用數字PCR進行胎兒分數檢測的方法，其特征在于，包括以下步驟：
步驟一、提取樣本中的DNA：從孕婦外周血中提取DNA，得到樣品DNA；
步驟二、將步驟一得到的樣品DNA、多重PCR反應酶和目標基因的引物混勻后，進行數字PCR反應；
其中，所述目標基因的部分序列在孕婦外周血和胎兒胎盤細胞中存在超甲基化狀態或低甲基化狀態；所述目標基因的引物包含以下堿基序列：
GGGUUGGGAAGAAACUGUGGCACUUCGGUGCCAGCAACCC；
在所述數字PCR反應中，所述目標基因的引物包含三維結構，所述目標基因的引物包含不少于十個堿基的特殊核酸序列N，所述特殊核酸序列N只由腺嘌呤、鳥嘌呤和胸腺嘧啶組成。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述目標基因的部分序列在孕婦外周血和胎兒胎盤細胞的甲基化狀態不同。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，其中，所述數字PCR反應所采用的反應液不包含三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸組分。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括：將所述目標基因的引物進行預處理，所述預處理的方法為：將合所述目標基因的引物加入到緩沖液B中加熱至65~70℃，保溫5~10分鐘，然后冷卻至30~35℃，保溫25~30分鐘。
5.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟二所述數字PCR使用了至少十對引物，同時進行目標基因的檢測。
6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述緩沖液B的組分包括300~320 mMNaCl，5~7 mM MgCl2，20~25 mM Tris (pH 7.6)，1~5μM茶多酚。
7.一種運用數字PCR進行胎兒分數檢測的試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒通過數字PCR完成無創產前胎兒染色體多倍體的檢測，所述檢測試劑盒使用的引物包含不少于十個堿基的特殊核酸序列N，所述特殊核酸序列N只由腺嘌呤、鳥嘌呤和胸腺嘧啶組成。
8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒使用的反應液不包含三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸組分。
9.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒使用的引物包含三維結構。
10.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述檢測試劑盒使用了至少十對引物，同時進行目標序列的檢測。
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