[發明專利]引物組合、探針組合以及人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202110006876.7
• 申請日: 2021-01-05
• 公開（公告）號: CN112575123A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 曹雅倩;李靜靜;李振紅;付光宇
• 申請（專利權）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳

引物組合、探針組合以及人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒。本發明涉及生物檢測領域，特別涉及一種用于診斷高危型人乳頭瘤病毒(HPV)感染的PCR熒光探針檢測方法，利用本方法制備的試劑盒采用磁珠法提取宮頸脫落細胞中的人乳頭瘤病毒核酸，并進行實時熒光聚合酶鏈反應，對樣本中的14種HPV DNA型別進行檢測并分型HPV16/18型。同時聯合細胞學檢查進行女性宮頸癌篩查。本試劑盒可用于患者宮頸細胞樣本中高危型人乳頭瘤病毒的定性檢測，在檢測HPV31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68的同時分型鑒定HPV16和HPV18型。本試劑盒定性檢測患者宮頸細胞中的高危型HPV DNA，確定患者是否需要行陰道鏡檢查。

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別涉及引物組合、探針組合以及人乳頭瘤病毒核酸檢測試劑盒。

背景技術

人乳頭瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)是一類分子量較小的無包膜的雙鏈環狀DNA病毒，專性侵染和寄生人體生殖器官及其它組織器官的上皮細胞。目前已經鑒定出的HPV約有150種亞型，根據其致病性大小分為低危型和高危型。低危型HPV主要引起肛門皮膚及男性外生殖器、女性大小陰唇、尿道口、陰道下段的外生性疣類病變和低度子宮頸上皮內瘤。高危型HPV除可引起外生殖器疣外，更重要的是引起外生殖器癌、宮頸癌及高度子宮頸上皮內瘤變，其病毒亞型主要有HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型。

HPV在人群中極易傳播擴散，可通過直接或間接接觸交叉傳染，其感染部位隱蔽，發病隱匿，不易早期發現，可致多種增生性病變，在女性生殖系統所引起的最常見的惡性腫瘤為宮頸癌。宮頸癌是婦女中最常見的惡性腫瘤，主要發生于多產婦女的早期絕經期。每年全世界有約19萬人死于宮頸癌，而其中超過3/4的死亡發生在發展中國家。宮頸癌的發生率在所有癌癥中排名第七，而在婦女中排名第三，僅次于乳腺癌和大腸癌。在發展中國家，少于50％的患宮頸癌的婦女能存活5年以上，而在發達國家，5年存活率是66％左右。在過去的10年中，估計全世界每年有將近371000例新的侵入性宮頸癌，占到整個婦女癌癥的10％。宮頸癌高發病區主要位于中南美洲、南非、東非和加勒比地區，這些地區每年的平均發病率達到萬分之四。東歐和北美的發病率低于每年萬分之三，但在巴西東北部，發病率要比北美高10倍，一生中累積風險性可高達10％。

由于感染HPV是引起宮頸癌的一大原因，所以現在這一研究已成為宮頸癌預防的前沿學科。在西方工業化國家，對于所有的惡性腫瘤疾病，宮頸癌也許是公共預防措施做得最好的例子。對宮頸癌的病因學研究可知，高危HPV持續感染是子宮頸癌的主要致病因素，99.7％宮頸癌患者存在HPV感染。臨床研究顯示，從HPV的持續感染到一般的宮頸癌前病變并最終發展為宮頸癌大約需要8-10年。因此篩查是目前預防和早期診斷宮頸癌的主要手段。在檢出的所有型別中主要有HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68型。其中HPV16和HPV 18這兩種高危型別與70％的宮頸癌病例相關。早期宮頸病變的治療效果遠比宮頸癌的治療效果要好得多，因此，快速、準確的檢測出HPV高危型的感染，且能夠對16型和18型準確分型，對于早期治療和降低宮頸癌的發病率和死亡率等具有重要的意義。

現有宮頸癌的篩查技術可分兩類，基于形態學的方法是在細胞或組織水平檢查以識別不正常，基于分子生物學的方法是檢查子宮頸上皮瘤的宮頸癌的標志物。進一步區分這些方法可根據他們釋放借助于顯微鏡或物理和電光學的特性。本文總結了當前各種宮頸癌篩查的方法，而其中最關聯或最有先兆的方法總結在如下幾節。

宮頸巴氏(Pap)細胞學：Pap檢測是最早的癌癥檢測方法之一，毫無疑問，它同時也是現代醫學中最有成效的一種方法。Pap檢測主要是檢查宮頸癌先兆，通過重復檢測，可以密切監測可疑的或低度異常，或提議病人立即進行陰道鏡、細胞切片檢查，并對高度或嚴重的損害進行治療。通過Pap檢測預防侵入性宮頸癌，可在它還只是上皮組織時就阻止其惡性發展。