[發(fā)明專利]引物組合、探針組合以及人乳頭瘤病毒核酸檢測(cè)試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202110006876.7
• 申請(qǐng)日: 2021-01-05
• 公開（公告）號(hào): CN112575123A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 曹雅倩;李靜靜;李振紅;付光宇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州安圖生物工程股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳

1.引物探針組合，其特征在于，包括：

引物或其組合；和/或

探針或其組合；

(1)所述引物或其組合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一項(xiàng)：

Ⅰ、具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列；或

Ⅱ、具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列經(jīng)修飾、取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)堿基獲得的核苷酸序列或具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

III、與SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或具有SEQ ID No.1～30任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

IV、如Ⅰ、Ⅱ或III所示序列的互補(bǔ)序列；

(2)所述探針或其組合，具有如下所示的核苷酸序列中的任意一項(xiàng)：

V、具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列；或

VI、具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列經(jīng)修飾、取代、缺失或添加一個(gè)或多個(gè)堿基獲得的核苷酸序列或具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

VII、與SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列具有至少80％同源性的序列或具有SEQ ID No.31～37任意所示的核苷酸序列功能相近的核苷酸序列；或

VIII、如V、VI或VII所示序列的互補(bǔ)序列。

2.如權(quán)利要求1所述的引物探針組合，其特征在于，所述探針或其組合包括：

12個(gè)型別探針，具有SEQ ID No.31～34任意所示的核苷酸序列；所述12個(gè)型別包括HPV31、HPV33、HPV35、HPV39、HPV45、HPV51、HPV52、HPV56、HPV58、HPV59、HPV66、HPV68；

16型探針，具有如SEQ ID No.35所示的核苷酸序列；

18型探針，具有如SEQ ID No.36所示的核苷酸序列；

內(nèi)標(biāo)探針，具有如SEQ ID No.37所示的核苷酸序列。

3.如權(quán)利要求1或2所述的引物探針組合在制備檢測(cè)人乳頭瘤病毒或?qū)θ巳轭^瘤病毒分型的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述人乳頭瘤病毒包括高危型人乳頭瘤病毒HPV16型、HPV18型、HPV31型、HPV33型、HPV35型、HPV39型、HPV45型、HPV51型、HPV52型、HPV56型、HPV58型、HPV59型、HPV66型、HPV68型中的一種或多種。

5.試劑，其特征在于，包括如權(quán)利要求1或2所述的引物探針組合以及可接受的助劑。

6.如權(quán)利要求5所述的試劑，其特征在于，包括PCR第一反應(yīng)液和PCR第二反應(yīng)液；

以體系總量為20μL計(jì)，所述PCR第一反應(yīng)液包括：如權(quán)利要求1或2所述的引物探針組合中的引物或探針的含量分別為0.1～0.5μM；Trinice 30～100mM，KOAc 100～150mM，Tween20 0.005％～0.1％(v/v)，甘油0.1％～1％(v/v)，NaN30.1％～5％(w/v)，UDG酶1～10μL，rTth 1～5μL，dNTPs 0.11～0.6mM，DMSO 5～50μL，余量為超純水；

以體系總量為10μL計(jì)，所述PCR第二反應(yīng)液包括：醋酸錳1～6mM，醋酸鎂2～10mM，NaN30.01％～0.1％(w/v)，余量為超純水。

7.如權(quán)利要求5或6所述的試劑在制備檢測(cè)人乳頭瘤病毒或?qū)θ巳轭^瘤病毒分型的試劑盒中的應(yīng)用。

8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述人乳頭瘤病毒包括高危型人乳頭瘤病毒HPV16型、HPV18型、HPV31型、HPV33型、HPV35型、HPV39型、HPV45型、HPV51型、HPV52型、HPV56型、HPV58型、HPV59型、HPV66型、HPV68型中的一種或多種。

9.試劑盒，其特征在于，包括如1或2所述的引物探針組合或如權(quán)利要求5或6所述的試劑。