[發明專利]檢測血液中維生素K2(MK-7)含量的方法

有效

• 申請號: 202110006256.3
• 申請日: 2021-01-05
• 公開（公告）號: CN112834681B
• 公開（公告）日: 2023-09-12
• 發明（設計）人: 邱天祎;賈永娟;許麗;倪君君
• 申請（專利權）人: 北京和合醫學診斷技術股份有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 北京開陽星知識產權代理有限公司 11710
• 代理人: 丁繼恩

本發明提供了檢測血液中維生素K2(MK?7)含量的方法。一定檢測條件下利用高效液相串聯質譜儀分別檢測至少三個標準溶液，得到各標準溶液的色譜圖，各標準溶液中均含有濃度已知的維生素K2(MK?7)標準品及內標物；根據各標準溶液的色譜圖擬合得到標準曲線方程；將內標工作液和取自至少100μL血液的血液樣本混勻，加入無水乙醇并混勻，再加入正己烷并混勻，離心取上清液，用氮氣吹干上清液后加入含0?0.1％甲酸和5?20％水的乙腈溶液并混勻，離心取上清液得到待測樣本；再同樣檢測待測樣本得到其色譜圖；根據該色譜圖和標準曲線方程計算血液樣本中維生素含量。樣本前處理可不涉及到SPE過程，故可降低實驗成本，且血液用量少。

技術領域

本發明涉及臨床化學技術領域，特別涉及檢測血液中維生素K2(MK-7)含量的方法。

背景技術

維生素K又叫凝血維生素，包括K₁、K₂、K₃、K₄等幾種形式，其中K₁、K₂是天然存在的，屬于脂溶性維生素。所有維生素K都是在結構上相似，但側鏈越長吸收越好、生物活性越高、在血液中存在時間也越長。因此，長鏈的甲基萘醌類(特別是MK-7)是最優質的，因為它們能幾乎完全被人體吸收，并停留在血液中的時間最長。

已知最常見的成人VitK(Vitamin?K，維生素K)缺乏性出血，多發生于攝入含VitK低的膳食并服用抗生素的病人中，可見于吸收不良綜合征和其它胃腸疾病，如囊性纖維化、口炎性腹瀉、潰瘍性結腸炎等。此外，胎盤轉運VitK量少、新生兒初生時體內儲存量低及體內腸道的無菌狀態阻礙了VitK利用、母乳中VitK含量低、新生兒吸乳量少以及嬰兒未成熟的肝臟還不能合成正常數量的凝血因子等原因，使新生兒、小嬰兒普遍存在低凝血酶原癥。但若服用超過藥理劑量的VitK2，則會導致新生兒溶血性貧血、高膽紅素血癥和肝中毒，在成人則可誘發心臟病和肺病。

維生素K2(MK-7)，或稱Menaquinone-7、MK-7，分子式為C₄₆H₆₄O₂，是維生素K2的一個類型。在最新研究中，《阿爾茨海默病雜志》和《科學報告》上發表的論文，分別考察了鈣化導致的主動脈硬化對癡呆癥和視網膜動脈健康的影響。研究發現，這兩種疾病的發病條件都受到活性基質Gla蛋白(MGP)的影響，而當前最有效的血管鈣化抑制劑即為維生素K2(MK-7)。此外，還有研究表明MK-7具有防治骨質疏松的作用。綜上，對于血液中維生素K2(MK-7)的檢測具有重要的臨床意義。

目前，可以采用液相色譜質譜聯用法來檢測血液中維生素K2(MK-7)的含量，但血液樣本的前處理方法大多包括有SPE(Solid-Phase?Extraction，固相萃取)過程，使得實驗成本有所提高，且檢測所需血液用量較大。

發明內容

本發明提供了檢測血液中維生素K2(MK-7)含量的方法，血液樣本的前處理方法可以不涉及到SPE過程，故可降低實驗成本，且減少了血液樣本用量，可更好地應用于臨床檢驗。

為了達到上述目的，本發明是通過如下技術方案實現的：

本發明提供了檢測血液中維生素K2(MK-7)含量的方法，包括：

利用高效液相色譜串聯質譜儀，在一定檢測條件下，分別檢測至少三個標準溶液，得到各個標準溶液的色譜圖，其中，任一標準溶液中均含有濃度已知的維生素K2(MK-7)標準品及內標物，不同標準溶液中維生素K2(MK-7)標準品的濃度不同；

根據各個標準溶液的色譜圖，擬合得到維生素K2(MK-7)的標準曲線方程；