[發明專利]一種鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202110003200.2
• 申請日: 2021-01-04
• 公開（公告）號: CN112553348B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 林菲;林妗蓓;徐漢虹;韋加奇;王佳麗;李茂
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

本發明公開了一種鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記及其應用。該分子標記的核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；其中，含有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列為雌性，含有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列為雄性。本發明還相應設計了分子標記引物組，包括雌性特異性引物組SEQ ID NO：3～4和雄性特異性引物組SEQ ID NO：3～5，其中雌、雄樣本只有相應的雌、雄性特異性引物才能擴增得到特異條帶。本發明中提供的分子標記和引物組可以對未知性別的草地貪夜蛾，如幼蟲或鱗羽掉落的草地貪夜蛾成蟲進行性別鑒定，準確率高，為研究草地貪夜蛾的雌雄個體差異提供了一種工具。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，特別涉及一種鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記及其應用。

背景技術

草地貪夜蛾Spodoptera frugiperda是屬于鱗翅目夜蛾科灰翅夜蛾屬的一種昆蟲，該蟲源于北美，2019年1月入侵我國云南省，并迅速擴展到全國26個省份^[1-3]。草地貪夜蛾作為聯合國糧農組織全球預警的跨國界遷飛性重大害蟲^[4]，具有寄主范圍寬、適生區域廣、增殖潛能強、擴散速度快、突發危害重等特點^[5]。

草地貪夜蛾與其他鱗翅目昆蟲一樣，危害主要發生在幼蟲時期，而目前針對草地貪夜蛾幼蟲時期的雌雄為害行為特點差異的研究較少，其原因在于沒有快速簡便的針對幼蟲的性別鑒定手段。草地貪夜蛾與許多鱗翅目昆蟲一樣，在蛹和成蟲時期便不再取食，故而幼蟲時期的取食量對其之后化蛹、羽化、產卵、遷飛等行為具有重要影響，那么不同性別的幼蟲取食量之間是否具有差異呢？林玉英等(2017)發現葉子織蛾幼蟲在幼蟲1齡時期，雌蟲的取食量顯著大于雄蟲^[6]。覃呂高(2012)研究發現雄蠶比雌蠶有可能有更高的ATP合成能力，從而使得雄蠶更健壯,生長速度也比雌蠶更快^[7]。另外，許多研究表明，昆蟲幼蟲時期在抵抗高溫、抗核型多角病毒等方面有性別差異^[8～9]。同時，許多研究表明，昆蟲在幼蟲時期的取食量、應對高溫等方面有性別差異，成蟲時期在感光、觸角結構等方面也存在顯著差異^[11]。更重要的是，草地貪夜蛾入侵中國后，全國開展了統防通治措施，預測預報顯得尤為重要。燈誘、性誘和食誘捕獲的成蟲，通常難以判斷性別。

目前草地貪夜蛾的性別主要是通過形態差異進行判斷，具體是通過蛹期和成蟲時期的外露生殖器及翅上的斑紋^[10]，缺乏對幼蟲有效的形態學判斷標準。田間捕捉的草地貪夜蛾成蟲由于其活躍性強，鱗羽容易掉落，給性別的鑒定帶來困難。對于鱗羽掉落的草地貪夜蛾樣本和未經過性別鑒定的DNA樣本，也缺乏有效的性別鑒定手段。因此，開發簡便、準確的分子標記，用于鑒定幼蟲期的草地貪夜蛾的性別具有理論和實際應用意義。

性信息素結合蛋白PBP在草地貪夜蛾的信息素識別過程中發揮重要作用，雄蟲通過觸角感受雌蟲性腺釋放的性信息素，尋找合適的交配對象，因此在功能上，雌雄蟲的性信息素結合蛋白必然存在差異。牛小慧(2011)對甜菜夜蛾的不同PBP蛋白進行RT-PCR檢測發現，PBP蛋白在雌雄蟲之間的表達量存在顯著差異^[12]；劉蘇等(2020)等則通過對草地貪夜蛾4個性信息素結合蛋白基因的克隆及表達模式分析發現，定位于雌雄成蟲觸角上的SfruPBP1和SfruPBP2蛋白在雄蟲中具有更高的表達量^[13]。而草地貪夜蛾性信息素結合蛋白PBP在雌雄蟲中存在的這些差異說明，根據雌雄蟲PBP差異來開發草地貪夜蛾性別鑒定的分子標記是可行。本發明提供了一種用于草地貪夜蛾性別鑒定的分子標記，為研究草地貪夜蛾某些形狀可能存在的性別差異提供了快速有效的手段。

發明內容

本發明的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種草地貪夜蛾性別差異性分子標記。

本發明的另一目的在于提供一種鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記引物。

本發明的又一目的在于提供所述鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記引物的應用。