[發明專利]一種鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記及其應用

有效

• 申請號: 202110003200.2
• 申請日: 2021-01-04
• 公開（公告）號: CN112553348B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 林菲;林妗蓓;徐漢虹;韋加奇;王佳麗;李茂
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

1.一種草地貪夜蛾性別差異性分子標記，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示；其中，含有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列為雌性，含有SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列為雄性。

2.根據權利要求1所述的草地貪夜蛾性別差異性分子標記，其特征在于：所述的SEQ IDNO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列采用PCR引物檢測，根據PCR檢測結果鑒定草地貪夜蛾的性別。

3.根據權利要求2所述的草地貪夜蛾性別差異性分子標記，其特征在于：

所述的PCR引物如SEQ ID NO：3～5所示。

4.一種鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記引物組，其特征在于：所述的分子標記引物組包括雌性特異性引物組和雄性特異性引物組；其中，

雌性特異性引物組由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4組成；

雄性特異性引物組由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5組成。

5.一種鑒別草地貪夜蛾性別的試劑盒，其特征在于：含有權利要求4鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記引物組。

6.權利要求1～3任一項所述的草地貪夜蛾性別差異性分子標記，權利要求4所述的鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記引物組以及權利要求5所述的鑒別草地貪夜蛾性別的試劑盒中的至少一種在草地貪夜蛾的性別鑒定中的應用。

7.一種鑒別草地貪夜蛾性別的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)提取基因組DNA

提取待測草地貪夜蛾的基因組DNA；

(2)PCR擴增

以提取的基因組DNA為模板，利用權利要求4所述的鑒別草地貪夜蛾性別的分子標記引物組中的SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4，以及SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5分別進行擴增，得到PCR擴增產物；

(3)結果判斷

①采用瓊脂糖凝膠電泳對PCR擴增產物進行檢測：若用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物擴增得到452bp的電泳條帶，則為雌性草地貪夜蛾；若用SEQ ID NO：3和SEQ IDNO：5所示的引物擴增得到456bp的電泳條帶，則為雄性草地貪夜蛾；

和/或：

②對PCR擴增產物進行測序：若用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的引物擴增得到如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，則為雌性草地貪夜蛾；若用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：5所示的引物擴增得到如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，則為雄性草地貪夜蛾。

8.根據權利要求7所述的鑒別草地貪夜蛾性別的方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的草地貪夜蛾為性別已知或未知的草地貪夜蛾的蟲蛹、幼蟲或成蟲。

9.根據權利要求8所述的鑒別草地貪夜蛾性別的方法，其特征在于：

步驟(1)中所述的草地貪夜蛾為性別未知的草地貪夜蛾幼蟲或鱗羽掉落的草地貪夜蛾成蟲。

10.根據權利要求8所述的鑒別草地貪夜蛾性別的方法，其特征在于：

步驟(2)中所述的PCR擴增的體系為15μL擴增體系：Primer STAR Max 6.25uL，10μM的分子標記引物組的引物各0.5μL，基因組DNA 0.5μL，加ddH2O至15μL；

步驟(2)中所述的PCR擴增的反應程序為：98℃預變性2min；98℃變性10S，58℃退火30S，72℃延伸30S，35個循環；72℃延伸5min。