[發(fā)明專利]判別方法、熒光測定裝置和檢查劑

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202080055429.4
• 申請日: 2020-08-05
• 公開（公告）號: CN114174528A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設計）人: 石原和幸;菊地亙;細川真弓;伊東愛
• 申請（專利權）人: 學校法人東京齒科大學;株式會社吉田制作所
• 主分類號: C12Q1/37
• 分類號: C12Q1/37;C12Q1/04;G01N21/64
• 代理公司: 北京華夏正合知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營;栗濤

本發(fā)明提供能夠根據(jù)酶活性簡便地判別牙周病的病原菌的基因型的判別方法、熒光測定裝置和檢查劑。判別方法判別牙周病的病原菌的基因型，向液體試樣照射激發(fā)光，根據(jù)從液體試樣發(fā)出的熒光的強度來判別基因型，其中，液體試樣包含牙周病的病原菌的菌體或菌體提取物、和熒光標記病原菌的酶反應的底物而成的試劑，且被調(diào)整為pH7.0以上且pH8.5以下進行了酶反應。熒光測定裝置具有：照射機構，向液體試樣照射激發(fā)光；檢測機構，檢測從液體試樣發(fā)出的熒光；判別機構，根據(jù)檢測出的熒光的強度判別基因型。檢查劑用于判別牙周病的病原菌的基因型，包含熒光標記病原菌的酶反應的底物而成的試劑和溶解試劑的pH緩沖液，pH緩沖液為pH7.0以上且pH8.5以下。

技術領域

本發(fā)明涉及一種用于判別牙周病的病原菌的基因型的判別方法、熒光測定裝置和檢查劑。

背景技術

在人體的口腔內(nèi)，存在著幾百種的口腔內(nèi)細菌。這些口腔內(nèi)細菌中的牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonas gingivalis)、齒垢密螺旋體(Treponema denticola)、福賽坦氏菌(Tannerella forsythia)這3種被分類為與牙周病的相關性高的紅色復合體(Redcomplex)。

牙周病是由口腔內(nèi)細菌引起的炎癥疾病，其不僅對牙周組織產(chǎn)生影響，而且被指出除了心肌梗塞、糖尿病等以外，還與動脈硬化等全身性疾病相關。以往，牙周病的診斷采用使用探針來檢查牙周袋的深度或有無出血的探測檢查、用于觀察牙槽骨等的X射線檢查等。另外，如專利文獻1、2所記載的那樣，還開發(fā)出一種用于檢查病原菌的存在的體外診斷用的檢查劑。

在細菌學、臨床的領域中，認為在被分類為紅色復合體的3種細菌之中，對牙周病的重癥化、即牙槽骨吸收的進展產(chǎn)生重大影響的是牙齦卟啉單胞菌(Pg菌)。在Pg菌的菌體的表面具有菌毛，已知菌毛等菌體表面的成分與Pg菌在口腔內(nèi)的黏附與定殖有很大相關。

作為編碼Pg菌的菌毛蛋白的基因，有編碼菌毛蛋白的亞基的fimA基因。已確認fimA基因表現(xiàn)出基因多態(tài)性，且被分類為I～V型(1～5型)的5種。以往，已報道了Pg菌在口腔內(nèi)的黏附能力與定殖能力或致病性有可能會按fimA基因的基因型而不同。

例如，在非專利文獻1中報道了，具有健康的牙周組織的成人的fimA基因的I型的保有率為約70％，V型的保有率為約30％，其他的小于10％左右，另一方面，成人的牙周炎患者的II型(2型)的保有率為約小于60％，IV型(4型)的保有率為約小于20％，其他的小于10％左右。報道了從進展后的牙周炎患者檢測到的Pg菌的90％以上為II型。

[現(xiàn)有技術文件]

[專利文獻]

專利文獻1：日本發(fā)明專利公開公報特開2010-130924號

專利文獻2：日本發(fā)明專利公開公報特表2007-519923號[非專利文獻]

非專利文獻1：天野敦雄，“Porphyromonas gingivalis菌毛的黏附能力與基因多態(tài)性的牙周致病性的關系”，日本牙周病學會會刊，2003年，45卷，4號，p.357-363

發(fā)明內(nèi)容

[發(fā)明所要解決的技術問題]

存在如下啟示，即，牙周病的病原菌的基因型有可能如Pg菌的fimA基因那樣，對牙周病的病理產(chǎn)生相互不同的影響。據(jù)此，在對牙周病進行診斷、治療與預防時，如果能夠判別構成患者的口腔菌群的基因型，就有可能能夠適當?shù)卦u價牙周病的病理或者預測重癥化的可能性。

以往，作為判別基因型的方法，采用利用RT-PCR等的分子生物學的方法。但是，分子生物學的方法在操作上費時費力，難以簡便地實施。另外，分子生物學的方法一方面能夠間接地測量基因的拷貝數(shù)或細胞數(shù)，但另一方面，無法測量實際使牙周病進展的酶活性。