[發(fā)明專利]用于mRNA遞送的合成脂質(zhì)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202080054813.2
• 申請(qǐng)日: 2020-06-04
• 公開（公告）號(hào): CN114173762A
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: Q·徐;M·王
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 塔夫茨大學(xué)信托人
• 主分類號(hào): A61K9/127
• 分類號(hào): A61K9/127;A61K48/00;C12N15/113;C12N15/86
• 代理公司: 中國(guó)專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 羅文鋒;李唐

提供了治療人類脂蛋白代謝障礙或心血管疾病的方法，其包括給予需要它的受試者包含脂質(zhì)、CRISPR/Cas9 mRNA和單引導(dǎo)RNA(sgRNA)的類脂納米顆粒。

相關(guān)申請(qǐng)

本申請(qǐng)要求2019年6月4日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)62/857,111的權(quán)益，其內(nèi)容通過參考以其全部結(jié)合至本文中。

政府支持

本發(fā)明為在美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院(National Institutes of Health)授予的資助號(hào)EB024041和TR002636下在政府支持下完成的。政府對(duì)本發(fā)明享有一定權(quán)利。

背景

血管生成素樣3 (ANGPTL3)為一種用于調(diào)控血漿脂蛋白水平的酶。有些人患有ANGPTL3缺陷，這是由ANGPTL3基因中自然發(fā)生的功能喪失突變引起的。這些患者顯示出血液甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)降低，沒有任何明顯的因這種喪失引起的臨床風(fēng)險(xiǎn)或并發(fā)癥。最近的遺傳和藥理學(xué)研究證實(shí)了這一發(fā)現(xiàn)，并且表明ANGPTL3敲低可賦予一些保護(hù)性益處，使ANGPTL3成為用于治療人類脂蛋白代謝障礙的有吸引力的治療靶標(biāo)。最近已經(jīng)驗(yàn)證了針對(duì)ANGPTL3的兩種不同的治療抑制策略。在一項(xiàng)臨床試驗(yàn)中，一種ANGPTL3靶向單克隆抗體依維蘇單抗(evinacumab)已證明可有效降低健康人類志愿者的LDL-C和TG水平。這些結(jié)果與一項(xiàng)研究一致，該研究發(fā)現(xiàn)給予靶向ANGPTL3信使RNA (mRNA)的反義寡核苷酸(ASO)可在小鼠中實(shí)現(xiàn)降低脂質(zhì)水平以及減緩動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展。此外，還觀察到人類致動(dòng)脈粥樣硬化脂蛋白的水平降低，并且在其I 期隨機(jī)臨床試驗(yàn)中沒有記錄到嚴(yán)重的不良事件。這些觀察結(jié)果有力地證明了ANGPTL3的治療性拮抗作用在降低脂質(zhì)水平和動(dòng)脈粥樣硬化心血管疾病的發(fā)病率方面為有效和安全的。

CRISPR/Cas9 (成簇的規(guī)律間隔的短回文重復(fù)序列[CRISPR]/CRISPR相關(guān)蛋白9)系統(tǒng)為最具革命性的基因組編輯工具之一。CRISPR/Cas9以靶向(即序列特異性)方式引入DNA雙鏈斷裂(DSB)，然后通過非同源末端連接(NHEJ)或同源定向修復(fù)(HDR)修復(fù)DSB。與短暫的常規(guī)ASO或抗體療法相比較，CRISPR/Cas9系統(tǒng)可誘導(dǎo)永久性功能喪失的靶基因突變，在編輯的細(xì)胞中產(chǎn)生長(zhǎng)期治療效果，使CRISPR/Cas9成為用于治療人類疾病有希望的候選者。然而，CRISPR/Cas9機(jī)構(gòu)的安全、有效和特異性遞送仍為一個(gè)巨大的技術(shù)挑戰(zhàn)，這限制了該技術(shù)的治療應(yīng)用。病毒載體(比如腺病毒或腺相關(guān)病毒)的使用通常提供非常高的編輯效率，但也帶來與不期望的插入誘變和潛在的生物安全問題相關(guān)的重大安全風(fēng)險(xiǎn)，這限制了其應(yīng)用。相比之下，非病毒納米顆粒(比如脂質(zhì)納米顆粒(LNP)、金納米顆粒和聚合物納米顆粒)具有更好的安全性特征，已被開發(fā)用于CRISPR質(zhì)粒DNA、信使RNA (mRNA)和核糖核蛋白(RNP)的遞送，一般地以降低遞送效率為代價(jià)。盡管CRISPR以DNA、mRNA和RNP形式中的每一種遞送均有潛在優(yōu)勢(shì)，但mRNA遞送對(duì)于體內(nèi)基因組編輯應(yīng)用可能特別有希望。

概述

一方面，本公開提供治療人類脂蛋白代謝障礙或心血管疾病的方法，其包括給予需要它的受試者包含脂質(zhì)、CRISPR/Cas9 mRNA和單引導(dǎo)RNA (sgRNA)的類脂(lipidoid)納米顆粒，其中

sgRNA為單引導(dǎo)血管生成素樣3 (sgANGPTL3)或單引導(dǎo)前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草桿菌蛋白酶/kexin 9型(sgPCSK9)；

脂質(zhì)由以下式I或其藥學(xué)上可接受的鹽表示：

(I)，

其中

R^頭部為