[發明專利]用于懸浮培養粘附性細胞的培養基組合物的制造方法

在審

• 申請號: 202080048520.3
• 申請日: 2020-07-03
• 公開（公告）號: CN114040964A
• 公開（公告）日: 2022-02-11
• 發明（設計）人: 畑中大輔;金木達朗;林壽人
• 申請（專利權）人: 日產化學株式會社
• 主分類號: C12N5/02
• 分類號: C12N5/02;C12N5/0775
• 代理公司: 北京市金杜律師事務所 11256
• 代理人: 牛蔚然

本發明提供用于懸浮培養粘附性細胞的培養基組合物的制造方法，所述方法包括以下步驟：步驟(i)，使胞外基質擔載于由非水溶性多糖類構成的納米纖維上，步驟(ii)，將通過步驟(i)得到的擔載胞外基質的納米纖維添加于培養基中。

技術領域

本發明涉及用于懸浮培養粘附性細胞的培養基組合物的制造方法等。

背景技術

近年來，以醫療、美容領域為中心，研發了將細胞移植、注入生物體內的方法。其中，成體干細胞、祖細胞因比多能性干細胞癌化風險低、分化時間短等理由而受到關注。

利用這些細胞時，需要大量提供狀態良好的細胞，作為其方法，已知將干細胞等在粘附于微載體等的狀態下進行培養、使其增殖的方法。

然而，目前通常能獲得的微載體被指出了下述課題：在靜置條件下會在培養液中發生沉降，因此在培養時需要進行攪拌，由于該攪拌造成微載體彼此的碰撞等引起細胞死亡等。另外，細胞增殖的效率也不充分，期待進一步的改良。

本申請的發明人使用提高了水中分散性的多糖類等納米纖維，開發了用于將動植物細胞及/或組織以懸浮狀態進行培養的培養基組合物(專利文獻1)。

本申請的發明人還發現，包含非水溶性多糖類的納米纖維能夠成為粘附性細胞的i)懸浮培養、ii)分化誘導、iii)非冷凍條件下的運輸或保存、iv)移植、v)從培養上清液回收生理活性物質等各種操作中共通的載體(專利文獻2、專利文獻3)。

現有技術文獻

[專利文獻]

[專利文獻1]WO2015/111686

[專利文獻2]WO2017/175751

[專利文獻3]WO2018/182016

發明內容

發明要解決的課題

本發明的課題在于提供與成體干細胞、祖細胞等粘附性細胞的大量生產相關的技術。

用于解決課題的手段

本申請的發明人為了解決上述課題而反復進行了深入研究，結果發現，通過使用將胞外基質擔載于由非水溶性多糖類構成的納米纖維上而得的物質作為載體基材來懸浮培養粘附性細胞，可以非常高效地促進該粘附性細胞的增殖。另外還發現，通過將擔載有胞外基質的納米纖維混合于液體培養基中，并將粘附性細胞在粘附于該納米纖維的狀態下進行培養，可以將該細胞在靜置的狀態下進行懸浮培養，或者通過僅追加新鮮的培養基組合物而不進行基于胰蛋白酶等的細胞剝離處理就可以進行擴大培養等。本申請的發明人基于上述見解繼續進行研究，從而完成了本發明。

即，本發明如下所述。

[1]用于懸浮培養粘附性細胞的培養基組合物的制造方法，所述方法包括以下步驟：

步驟(i)，使胞外基質擔載于由非水溶性多糖類構成的納米纖維上，

步驟(ii)，將通過步驟(i)得到的擔載胞外基質的納米纖維添加于培養基中。

[2]如[1]所述的方法，其中，非水溶性多糖類為選自由甲殼素、殼聚糖、纖維素、和半纖維素組成的組中的至少一種。

[3]如[1]或[2]所述的方法，其中，胞外基質為選自由膠原蛋白、纖連蛋白、玻連蛋白、層粘連蛋白、RGD序列、和鈣粘蛋白組成的組中的至少一種。

[4]如[1]～[3]中任一者所述的方法，其中，納米纖維擔載胞外基質的量為每1g納米纖維0.01～50mg胞外基質。

[5]如[1]～[4]中任一者所述的方法，其中，非水溶性多糖類為甲殼素。