[發明專利]一種核酸適配體光波導傳感器及應用其的檢測方法

有效

• 申請號: 202080001217.8
• 申請日: 2020-03-16
• 公開（公告）號: CN112400112B
• 公開（公告）日: 2022-10-28
• 發明（設計）人: 婁新徽;趙家興;陸張偉;王朔
• 申請（專利權）人: 首都師范大學
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/50
• 代理公司: 北京展翅星辰知識產權代理有限公司 11693
• 代理人: 王文生

1.一種核酸適配體光波導傳感器，其特征在于，其為具有靶標原位富集和純化功能的核酸適配體光波導傳感器，所述靶標為AOH，具有高效靶標萃取能力的萃取層SPME和靶標特異的核酸適配體共同組裝在光纖傳感界面上，所述萃取層SPME為吐溫80。

2.根據權利要求1所述的核酸適配體光波導傳感器，其特征在于，所述靶標特異的核酸適配體為NH₂-AAAAAAAAAATAGCTTAACTAGTGTTCAAGCTG，所述靶標特異的核酸適配體連接在光纖表面。

3.一種進行小分子檢測的方法，其特征在于，其基于小分子靶標和與核酸適配體互補短鏈DNA與偶聯在光纖表面的核酸適配體競爭性結合，實現對小分子靶標的定量檢測，所述小分子為AOH，具有高效靶標萃取能力的萃取層SPME和靶標特異的核酸適配體共同組裝在光纖傳感界面上，所述萃取層SPME為吐溫80。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，光纖表面的SPME把溶液中的小分子高效富集到光纖表面附近，促進了偶聯在光纖表面的核酸適配體和小分子之間的結合。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：步驟1:光纖表面的羥基化；步驟2:光纖表面的硅烷化；步驟3:核酸適配體在光纖表面的偶聯；以及步驟4:還原及封閉。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟1:光纖表面的羥基化如下：首先將表面處理干凈的光纖在體積比為3:1的濃硫酸：30%過氧化氫混合溶液中于100-120℃下浸泡1小時，然后將光纖從混合溶液中取出，用超純水洗到中性，氮氣吹干，在70-90℃烘箱中放置4-6小時，取出后在干燥器中冷卻至室溫。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，步驟2:光纖表面的硅烷化如下：將上述光纖放入3-氨丙基三乙氧基硅烷的無水甲苯溶液中，在室溫下浸泡反應1-2小時，取出后分別用無水甲苯，v/v = 1:1的甲苯-乙醇,乙醇沖洗三遍，氮氣吹干，在180℃烘箱中放置1小時，取出后在干燥器中冷卻至室溫。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，步驟3:核酸適配體在光纖表面的偶聯：將硅烷化后的光纖放入含有戊二醛的10 毫摩爾每升的磷酸鹽緩沖溶液中，于室溫反應4小時；反應結束后用超純水清洗三次，氮氣吹干，將光纖放入氨基修飾的核酸適配體的溶液中，室溫下浸泡反應6-8小時，隨后用超純水清洗三次。

9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，步驟4:還原及封閉如下：將上述光纖放入硼氫化鈉溶液中浸泡30分鐘，用一定濃度的萃取劑封閉光纖界面，隨后用超純水清洗三次，放入4℃冰箱儲存。

10.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，還包括如下步驟: 步驟5:將光纖安裝到波導傳感器的反應池中，基線穩定后，向反應池中泵入含有一定濃度的小分子靶標和熒光修飾的核酸適配體的互補鏈的混合溶液，實時測試熒光信號的變化；步驟6:用十二烷基磺酸鈉溶液沖洗光纖進行傳感界面的再生；重復步驟5；步驟7:繪制光波導傳感器檢測不同靶標的工作曲線；步驟8:選擇性實驗：將步驟5中的靶標換成選擇性測試的物質即可。