[發明專利]一種促進蛋白二聚體形成的拉鏈扣結構及其應用

在審

• 申請號: 202080000784.1
• 申請日: 2020-04-26
• 公開（公告）號: CN111655734A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 楊翔;樓建榮;謝桂華
• 申請（專利權）人: 廣州市雷德生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C07K14/35;C07K14/00;G01N33/68;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 廣州嘉權專利商標事務所有限公司 44205
• 代理人: 薛建強;許飛

1.一種促進蛋白二聚體或環肽形成的方法，包括在肽鏈的末端引入二聚體拉鏈扣，所述二聚體拉鏈扣具有如下特性：

1)含有至少2個，優選2～9個，3～8個，3～7個，4～6個荷電氨基酸殘基；

2)具有無電荷的間隔區，間隔區的長度為1～5個氨基酸，優選1～4、1～3個、1～2個；

3)所述間隔區中的至少一個含有至少一個半胱氨酸殘基；優選的，半胱氨酸殘基的數量為1～4，1～3個，1～2個；

4)兩段二聚體拉鏈扣之間可以通過荷電氨基酸的靜電作用相互親和并通過間隔區的半胱氨酸殘基形成二硫鍵。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述間隔區兩側的荷電氨基酸對稱排列或非對稱排列。

3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于：所述荷電氨基酸為荷正電的氨基酸或荷負電的氨基酸，所述荷正電的氨基酸選自賴氨酸、精氨酸或組氨酸；所述荷負電的氨基酸選自天冬氨酸或谷氨酸。

4.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于：至少一條肽鏈的N端和C端分別連接有二聚體拉鏈扣；特別的，肽鏈的N端和C端分別連接有二聚體拉鏈扣。

5.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于：至少一條肽鏈上有標簽序列；優選的，兩肽鏈各帶一個標簽序列；

優選的，所述標簽序列包括Flag標簽序列和組氨酸序列。

6.根據權利要求1～3任一項所述的方法，其特征在于：

所述蛋白二聚體其中的一條肽鏈為結核蛋白ESAT6，另一條肽鏈為結核蛋白CFP10；

優選的，所述二聚體拉鏈扣位于結核蛋白ESAT6和結核蛋白CFP10的C端；

所述環肽包括CCP線性氨基酸序列，所述二聚體拉鏈扣分別位于CCP線性氨基酸序列的N端和C端；

優選的，所述二聚體拉鏈扣具有4個荷電氨基酸殘基，荷電氨基酸優選分別為賴氨酸和天冬氨酸，所述二聚體拉鏈扣中間具有1或2個半胱氨酸；

優選的，環肽的整體結構為：KKCK-CCP線性氨基酸序列-DCDD。

7.一種帶有二聚體拉鏈扣的蛋白或多肽，其特征在于：所述蛋白或多肽的至少一個末端連接有二聚體拉鏈扣，所述二聚體拉鏈具有如下特性：

1)含有至少2個，優選2～9個，3～8個，3～7個，4～6個荷電氨基酸殘基；

2)具有無電荷的間隔區，間隔區的長度為1～5個氨基酸，優選1～4、1～3個、1～2個；

3)所述間隔區中的至少一個含有至少一個半胱氨酸殘基；優選的，半胱氨酸殘基的數量為1～4，1～3個，2～3個；

4)兩段二聚體拉鏈扣之間可以通過荷電氨基酸的靜電作用相互親和并通過間隔區的半胱氨酸殘基形成二硫鍵。

8.根據權利要求7所述的蛋白或多肽，其特征在于：所述間隔區兩側的荷電氨基酸對稱排列或非對稱排列。

9.根據權利要求7所述的蛋白或多肽，其特征在于：

所述蛋白為結核蛋白ESAT6和結核蛋白CFP10；所述二聚體拉鏈扣分別位于結核蛋白ESAT6和結核蛋白CFP10的C端；

所述蛋白CCP線性氨基酸序列，所述二聚體拉鏈扣分別位于CCP線性氨基酸序列的N端和C端；

優選的，所述二聚體拉鏈扣具有4個電荷的荷電氨基酸殘基，荷電氨基酸優選分別為K和D，所述二聚體拉鏈扣中間具有1或2個半胱氨酸；

優選的，環肽的整體結構為：KKCK-CCP線性氨基酸序列-DCDD。

10.一種表達載體，其特征在于：其插入有可表達權利要求1～9任一項含有二聚體拉鏈扣的肽鏈的核酸序列。

11.一種制備拉鏈扣型蛋白二聚體或環肽的方法，包括：

構建表達載體：其中，表達載體如權利要求10所述；

表達：將表達載體轉入表達菌株或細胞，表達、分離、純化得到拉鏈扣型蛋白二聚體或環肽。