[發明專利]一種抗血小板抗體檢測信號制劑的制備方法、抗血小板抗體檢測信號制劑及應用

在審

• 申請號: 202011644074.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112666357A
• 公開（公告）日: 2021-04-16
• 發明（設計）人: 嚴俊;師麗佳;劉濤;蔣友紅;卿小紅
• 申請（專利權）人: 寶銳生物科技泰州有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/577;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 北京超凡宏宇專利代理事務所(特殊普通合伙) 11463
• 代理人: 張金銘

本發明涉及醫藥制劑技術領域，尤其是涉及一種抗血小板抗體檢測信號制劑的制備方法、抗血小板抗體檢測信號制劑及應用，所述制備方法包括，取配方量的均勻包被了單克隆抗人IgG抗體的肉眼可辨顏色的微球或微粒和復合穩定劑，用PBS溶液均勻溶解得到檢測信號制劑。本發明提供的抗血小板抗體檢測信號制劑的制備方法，采用肉眼可辨顏色的微球代替紅細胞，在復合穩定劑的作用下，能夠大大地延長保存時間，實現了與檢測產品的其他組分同步購買、儲藏和使用，其穩定保存周期可達一年以上，為抗血小板抗體檢測產品的生產和運輸過程都提供了極大的方便。

技術領域

本發明涉及醫藥制劑技術領域，尤其是涉及一種抗血小板抗體檢測信號制劑的制備方法、抗血小板抗體檢測信號制劑及應用。

背景技術

血小板輸注可用于預防和治療血小板數量減少或功能缺失患者的出血癥狀，恢復和維持人體的正常止血和凝血功能。然而，長期的血小板輸注可能帶來血小板輸注無效的嚴重后果，即連續兩次輸注足量血小板，患者臨床出血癥狀未見改善，血小板計數未見明顯增高。血小板抗原經輸血、妊娠及骨髓移植等可刺激機體產生抗血小板抗體致敏血小板并使其破壞，引起血小板減少，導致患者出現瘀點、瘀斑、出血甚至死亡等嚴重后果。HLA致敏是最常見的血小板輸注無效的免疫因素。因此，檢測患者是否有抗血小板抗體，可輔助臨床采取恰當的預防和治療措施，特別是能為抗血小板抗體陽性患者進行交叉配型，以篩選血小板相容性供者，可顯著減少血小板輸注無效癥的發生。

抗血小板抗體檢測試劑盒為各大醫院、血站輸血科提供了一個簡易、快捷的方法來檢測患者血清中是否有抗血小板抗體，可輔助臨床采取恰當的預防和治療措施，特別是能為抗血小板抗體陽性患者進行交叉配型以篩選血小板相容性供者，從而預防血小板輸注無效。目前國內外抗血小板抗體檢測注要有免疫細胞化學法、微柱凝膠法及固相凝集法三種。免疫細胞化學法由于需要專用儀器、繁瑣、耗時，不適于基層開展，微柱凝膠法容易造成結果誤差，而固相凝集法因靈敏度，特異性高而前景較好。

檢測抗血小板抗體現在商品化的試劑有ELISA類如GTI公司的MACE(篩查并區分HLA+HPA)，PAKAUTO(檢測自身抗體)，PAK12(鑒定HPA特異性)；固相紅細胞吸附類試劑如Immucor公司的capture P(篩查血小板抗體)，荷蘭Sanquin試劑MASPAT(篩查抗體)；免疫熒光技術如Onelambda公司的流式磁珠試劑FlowPRA(可鑒定HLA抗體特異性)。

Capture P檢測原理：Capture P是一種固相微孔板系統，通過血小板與其抗體之間的免疫反應來檢測血清或血漿中的抗血小板抗體。微孔板上預先包被有抗血小板單克隆抗體，加入血小板懸液后，通過離心將血小板固定在微孔上，再將低離子強度的緩沖液和患者血清加入到孔內，讓血清中的抗體與固定的血小板層充分結合，孵育后洗去未結合的血清，再加入鼠抗人IgG單克隆抗體致敏的紅細胞來檢測與血小板結合的抗體。當患者血清中抗血小板抗體為陽性時，指示紅細胞結合到血小板單層上的IgG抗體上，則顯示陽性反應。因此，陽性反應的特點是指示紅細胞平鋪在反應孔底部表面，而陰性反應是指示紅細胞聚集在孔底部中央形成細胞扣。

MASPAT檢測原理：抗血小板抗體檢測試劑盒(固相凝集法)的檢測原理是基于抗原/抗體反應的固相凝集技術。供者血小板通過離心固定在包被有血小板特異性鼠單克隆抗體的微孔內表面，加入1×PBST清洗液洗去未結合的血小板形成血小板單細胞層。將患者血清和LISS(低離子強度溶液)加入相應的微孔中孵育，使患者血清中的抗體與固定的血小板單細胞層結合。孵育結束后，再加入清洗液洗去未結合或非特異性結合的抗體。加入抗人IgG(橋接抗體)和人IgG致敏紅細胞后，通過離心微孔板的方法檢測樣本中與血小板結合的抗體。通過抗血小板抗體檢測用指示紅細胞(固相凝集法)在微孔中的狀態可直接肉眼觀察得出抗血小板抗體檢測的結果。陽性反應的特點是指示紅細胞平鋪在反應孔底部表面，而陰性反應是指示紅細胞聚集在孔底部中央。