[發明專利]一種扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應用

在審

• 申請號: 202011643671.1
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112587546A
• 公開（公告）日: 2021-04-02
• 發明（設計）人: 吳斌華;梁少華;溫俊昊;劉梓茂;羅輝;黃永梅
• 申請（專利權）人: 南方海洋科學與工程廣東省實驗室（湛江）
• 主分類號: A61K31/715
• 分類號: A61K31/715;A61P35/00
• 代理公司: 深圳市華勤知識產權代理事務所(普通合伙) 44426
• 代理人: 隆毅

本發明公開了一種扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應用，其應用過程如下：將肺癌細胞培養至80％融合，再進行傳代培養，選用完成傳代培養的傳代細胞，用含有扁藻硒化胞外多糖的細胞培養液培養細胞，最后進行實驗組和對照組的細胞增殖、細胞凋亡及凋亡相關蛋白表達實驗對比檢測。本發明中扁藻硒化胞外多糖溶液的干預使肺癌細胞增殖受抑，成功抑制了肺癌細胞的快速增殖，使肺癌細胞凋亡現象明顯增加，成功促進了肺癌細胞的自然凋亡，抑制了肺癌細胞無限增殖，使Bcl?2基因的蛋白表達水平顯著下降，Bax和Caspase?3基因的蛋白表達水平上調，誘導肺癌細胞發生凋亡。

技術領域

本發明涉及肺癌細胞治療技術領域，尤其涉及一種扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應用。

背景技術

肺癌作為全球較大的公共衛生問題之一，極大的危害人類的健康，惡性肺癌已不再只是發達工業國家的嚴重疾病，發展中國家面臨著更大的疾病負擔，對肺癌的防治顯得尤為重要。

A549細胞系是常用于體外研究肺癌的理想腫瘤模型，同時以正常肺上皮細胞Bease-2B細胞作為正常對照，從中分析扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療中的效果。扁藻是北部灣海域的特色微藻種類。它易于培養，生物活性分子如生物多糖含量較高。但扁藻多糖的功能比較弱，必須進行化學修飾以增強它的功能。硒多糖是由多糖和硒結合形成的有機硒化合物。通常，植物中的硒多糖的生物活性高于普通多糖的生物活性，并且更容易被人體吸收和利用。因此，硒多糖在免疫調節，抗腫瘤，抗氧化，抗衰老等方面具有廣泛的應用。

公開號CN110272504A發明名稱為“硒化扁藻胞外多糖的制備方法和硒化扁藻胞外多糖”公開了一種硒化扁藻胞外多糖的制備方法和硒化扁藻胞外多糖，但未公開扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應用。

為此，本發明探究了扁藻硒化胞外多糖治療肺癌細胞，觀察其對腫瘤細胞的增殖抑制和誘導凋亡的情況，并列明這種多糖誘導肺癌細胞凋亡的具體分子機制。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明所解決的技術問題是扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應用。

為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是一種扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應用，其應用過程如下：將肺癌細胞培養至80％融合，再進行傳代培養，選用完成傳代培養的傳代細胞，用含有扁藻硒化胞外多糖的細胞培養液培養細胞，最后進行實驗組和對照組的細胞增殖、細胞凋亡及凋亡相關蛋白表達實驗對比檢測。

所述應用過程包括以下具體步驟：

(1)肺癌細胞的培養

將肺癌細胞培養至80％融合，用濃度為0.25g/100mL的EDTA的胰蛋白酶液進行消化，重懸肺癌細胞，然后接種到培養皿中進行傳代培養，選取傳代細胞中的細胞進行實驗；

(2)對肺癌細胞增殖活性的干預

用PH值為7.4的磷酸鹽緩沖液將扁藻硒化胞外多糖溶解配成濃度為1mg/ml的扁藻硒化胞外多糖溶液，再采用2倍連續稀釋法將普通扁藻胞外多糖和扁藻硒化胞外多糖配成濃度為50-500μg/ml的溶液，使用所述普通扁藻胞外多糖溶液、扁藻硒化胞外多糖溶液對肺癌細胞增殖活性進行干預；

(3)肺癌細胞凋亡測試

扁藻硒化胞外多糖溶液干預完成后，以正常肺上皮細胞作同期對照，用計數法記錄經扁藻硒化胞外多糖溶液處理后肺癌細胞的死亡率；在凋亡試劑盒的輔助下，通過測定線粒體膜電位來分析肺癌細胞凋亡率；

(4)肺癌細胞凋亡相關蛋白的表達變化進行檢測

利用western blot方法對經過扁藻硒化胞外多糖溶液處理的肺癌細胞以及正常肺上皮細胞進行對比實驗，對BCL-2、Bax、Caspase-3凋亡基因的蛋白表達水平的變化進行檢測。

所述扁藻硒化胞外多糖作為促腫瘤細胞凋亡藥物采用藥用級別。