[發(fā)明專(zhuān)利]一種扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011643671.1
• 申請(qǐng)日: 2020-12-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112587546A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-04-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳斌華;梁少華;溫俊昊;劉梓茂;羅輝;黃永梅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗(yàn)室（湛江）
• 主分類(lèi)號(hào): A61K31/715
• 分類(lèi)號(hào): A61K31/715;A61P35/00
• 代理公司: 深圳市華勤知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44426
• 代理人: 隆毅

1.一種扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應(yīng)用，其特征在于，其應(yīng)用過(guò)程如下：將肺癌細(xì)胞培養(yǎng)至80％融合，再進(jìn)行傳代培養(yǎng)，選用完成傳代培養(yǎng)的傳代細(xì)胞，用含有扁藻硒化胞外多糖的細(xì)胞培養(yǎng)液培養(yǎng)細(xì)胞，最后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的細(xì)胞增殖、細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)實(shí)驗(yàn)對(duì)比檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用過(guò)程包括以下具體步驟：

(1)肺癌細(xì)胞的培養(yǎng)

將肺癌細(xì)胞培養(yǎng)至80％融合，用濃度為0.25g/100mL的EDTA的胰蛋白酶液進(jìn)行消化，重懸肺癌細(xì)胞，然后接種到培養(yǎng)皿中進(jìn)行傳代培養(yǎng)，選取傳代細(xì)胞中的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；

(2)對(duì)肺癌細(xì)胞增殖活性的干預(yù)

用PH值為7.4的磷酸鹽緩沖液將扁藻硒化胞外多糖溶解配成濃度為1mg/ml的扁藻硒化胞外多糖溶液，再采用2倍連續(xù)稀釋法將普通扁藻胞外多糖和扁藻硒化胞外多糖配成濃度為50-500μg/ml的溶液，使用所述普通扁藻胞外多糖溶液、扁藻硒化胞外多糖溶液對(duì)肺癌細(xì)胞增殖活性進(jìn)行干預(yù)；

(3)肺癌細(xì)胞凋亡測(cè)試

扁藻硒化胞外多糖溶液干預(yù)完成后，以正常肺上皮細(xì)胞作同期對(duì)照，用計(jì)數(shù)法記錄經(jīng)扁藻硒化胞外多糖溶液處理后肺癌細(xì)胞的死亡率；在凋亡試劑盒的輔助下，通過(guò)測(cè)定線粒體膜電位來(lái)分析肺癌細(xì)胞凋亡率；

(4)肺癌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)變化進(jìn)行檢測(cè)

利用western blot方法對(duì)經(jīng)過(guò)扁藻硒化胞外多糖溶液處理的肺癌細(xì)胞以及正常肺上皮細(xì)胞進(jìn)行對(duì)比實(shí)驗(yàn)，對(duì)BCL-2、Bax、Caspase-3凋亡基因的蛋白表達(dá)水平的變化進(jìn)行檢測(cè)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應(yīng)用，其特征在于，所述扁藻硒化胞外多糖作為促腫瘤細(xì)胞凋亡藥物采用藥用級(jí)別。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的扁藻硒化胞外多糖在肺癌治療上的應(yīng)用，其特征在于，所述肺癌細(xì)胞選用A549細(xì)胞系，其中的正常細(xì)胞選用正常肺上皮Bease-2B細(xì)胞系。