[發(fā)明專(zhuān)利]一種通用型TRUCK-T細(xì)胞、其制備方法以及用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011641112.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113122576A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 袁鵬飛;王飛;牛立超;付建強(qiáng);谷豐
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 博雅輯因（北京）生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/861
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/861;C12N15/90;C12N15/12;C12N15/62;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京彩和律師事務(wù)所 11688
• 代理人: 張紅春

本發(fā)明涉及一種制備通用型人類(lèi)TRUCK?T細(xì)胞的方法，包括:(i)通過(guò)基因編輯技術(shù)破壞所述人類(lèi)TRUCK?T細(xì)胞中：14號(hào)染色體第23016448位至第23016490位的TRAC基因組區(qū)域；和15號(hào)染色體第45003745位至第45003788位的B2M基因組區(qū)域；并且(ii)利用同源重組原理把CAR分子和外源細(xì)胞因子基因序列分別插入到TRAC和B2M切割位點(diǎn)，以利用T細(xì)胞自身的TRAC的啟動(dòng)子和NFAT進(jìn)行表達(dá)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基于CAR-T技術(shù)的免疫治療領(lǐng)域，具體涉及一種通用型TRUCK-T細(xì)胞(即，U-TRUCK-T細(xì)胞)。

背景技術(shù)

作為腫瘤免疫治療的主要手段之一，CAR-T細(xì)胞治療在白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤的治療中展現(xiàn)出驚艷的治療效果。目前全球CAR-T領(lǐng)先的幾大巨頭公司：諾華、Kite、Juno、Cellectis在靶點(diǎn)、共刺激區(qū)域、轉(zhuǎn)染方式等方面設(shè)計(jì)各具特色，諾華CTL019即將成為全球首個(gè)上市的CAR-T產(chǎn)品。國(guó)內(nèi)CAR-T治療發(fā)展緊隨美國(guó)，百花齊放，開(kāi)展的CAR-T臨床試驗(yàn)已上百項(xiàng)。

隨著2017年兩款針對(duì)CD19的CAR-T產(chǎn)品入市，CAR-T在血液腫瘤中的應(yīng)用也得到了世界認(rèn)可。但血液腫瘤病人只占腫瘤病人的23％，其余大多為實(shí)體腫瘤，而現(xiàn)如今實(shí)體瘤的治療手段有限，甚至一些實(shí)體瘤沒(méi)有靶向藥及治療手段。CAR-T在實(shí)體瘤上的應(yīng)用也越來(lái)越廣泛，目前有國(guó)內(nèi)外針對(duì)實(shí)體瘤開(kāi)展了近200多例臨床，主要集中在黑色素瘤、肝癌、肺癌、乳腺癌等高發(fā)性癌癥。雖然CAR-T在實(shí)體瘤中應(yīng)用取得了一定的進(jìn)展，但腫瘤微環(huán)境仍為導(dǎo)致許多臨床效果不理想的主要原因之一。因此如何讓CAR-T細(xì)胞更好的作用于腫瘤病灶已到達(dá)抑制腫瘤，乃至消滅腫瘤是目前急待解決的問(wèn)題。

介于CAR-T在治療腫瘤中的廣泛應(yīng)用，結(jié)合基因編輯，在第三代CAR-T的基礎(chǔ)上，引入外源細(xì)胞因子，將CAR-T改造為能夠招募其他天然免疫細(xì)胞，增加殺傷性因子釋放，降低腫瘤血管的生成，清除細(xì)胞外基質(zhì)等作用第四代CAR-T細(xì)胞，即通用型TRUCK-T，用于難治復(fù)發(fā)性實(shí)體瘤的治療。

由于CAR-T在實(shí)體瘤中有了廣泛的應(yīng)用，并取得了一定了療效，但治療效果不盡人意，使得CAR-T在治療實(shí)體瘤方面受到限制。基于CAR-T在實(shí)體瘤治療上無(wú)法達(dá)到血液瘤的治療效果的因素研究，腫瘤微環(huán)境及CAR-T未能重復(fù)的進(jìn)入實(shí)體瘤等因素為限制CAR-T在實(shí)體瘤中療效的主要原因。針對(duì)以上主要因素，結(jié)合基因編輯，在第三代CAR-T的基礎(chǔ)上，引入外源細(xì)胞因子，將CAR-T改造為能夠招募其他天然免疫細(xì)胞、增加殺傷性因子釋放、降低腫瘤血管的生成、清除細(xì)胞外基質(zhì)等作用的第四代CAR-T細(xì)胞，即通用型TRUCK-T，用于難治復(fù)發(fā)性實(shí)體瘤的治療。

根據(jù)現(xiàn)有技術(shù)報(bào)道，CAR-T臨床研究大都采用二代CAR-T技術(shù)，而采用第四代CAR-T技術(shù)在臨床上研究報(bào)道不多。傳統(tǒng)的TRUCK-T制備的T細(xì)胞主要來(lái)源于患者自身，在潔凈室(Good manufacture Practice，GMP)環(huán)境下經(jīng)過(guò)體外分離T細(xì)胞、激活、CAR和細(xì)胞因子利用慢病毒隨機(jī)插入基因組、培養(yǎng)擴(kuò)增，最后經(jīng)過(guò)質(zhì)控回輸回患者體內(nèi)。由于患者自身?xiàng)l件的影響導(dǎo)致不適合采血或采血分離T細(xì)胞后擴(kuò)增難的問(wèn)題會(huì)隨之而來(lái)。當(dāng)患者病情危急，從T細(xì)胞的分離到CAR-T的回輸，整個(gè)流程的等待時(shí)間也將是自體回輸要面臨的重大問(wèn)題。這些問(wèn)題給CAR-T技術(shù)的廣泛應(yīng)用帶來(lái)了局限性，因此目前CAR-T細(xì)胞治療的一個(gè)重要研究方向是如何使用一個(gè)健康獻(xiàn)血者的T細(xì)胞制備大量的CAR-T細(xì)胞，滿足患者的臨床使用。這一技術(shù)的建立將極大降低CAR-T療法的成本，可以更好的保證統(tǒng)一制備的細(xì)胞質(zhì)量，而且患者在需要時(shí)可以馬上得到CAR-T細(xì)胞進(jìn)行治療。