[發明專利]一種通用型TRUCK-T細胞、其制備方法以及用途

在審

• 申請號: 202011641112.7
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN113122576A
• 公開（公告）日: 2021-07-16
• 發明（設計）人: 袁鵬飛;王飛;牛立超;付建強;谷豐
• 申請（專利權）人: 博雅輯因（北京）生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N15/90;C12N15/12;C12N15/62;C12N5/10;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京彩和律師事務所 11688
• 代理人: 張紅春

1.一種制備通用型人類TRUCK-T細胞的方法，包括:

(i)從淋巴系統健康的受試者獲得T細胞，通過基因編輯技術破壞所述人類T細胞中：

14號染色體的TRAC基因區域；和

15號染色體的B2M基因區域；并且

(ii)利用同源重組原理把CAR分子和/或外源細胞因子基因序列插入到TRAC和/或B2M切割位點。

2.根據權利要求1所述的方法，其中，CAR分子利用T細胞自身的TRAC的啟動子啟動表達，外源細胞因子基因序列還包括NFAT序列。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，所述TRAC基因區域為14號染色體第23016448位至第23016490位；所述B2M基因區域為15號染色體第45003745位至第45003788位。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，利用同源重組原理把CAR分子插入到TRAC切割位點；把外源細胞因子基因序列插入到B2M切割位點。

5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述基因編輯技術包括基于鋅指核酸酶的基因編輯技術、TALEN基因編輯技術或CRRISPR/Cas基因編輯技術，優選地，所述CRRISPR/Cas基因編輯技術包括CRRISPR/Cas9技術。

6.根據權利要求5所述的方法，其中，在使用所述CRRISPR/Cas9技術時，針對待編輯的目標TRAC基因區域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.：2～5的sgRNA，而針對待編輯的目標B2M基因區域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.:15～22的sgRNA

優選地，在使用所述CRRISPR/Cas9技術時，針對待編輯的目標TRAC基因區域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.：2的sgRNA，而針對待編輯的目標B2M基因區域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.:20的sgRNA。

7.根據權利要求1所述的方法，其中，所述CAR靶向的靶標包括間皮素、CD19、CD123、CD20、GPC3、Her2、EGFR、NY-ESO-1、MUC1、EBV、PMSA、GD2、TAA。

8.根據權利要求1或7所述的方法，其中，所述外源細胞因子包括：IL-12、IL17、CCL19。

9.使用根據權利要求1至8中任一項所述的方法制成的通用型TRUCK-T細胞。

10.根據權利要求9所述通用型TRUCK-T細胞在制備用于治療患者中的癌癥的藥物的用途。

11.根據權利要求10所述的用途，其中所述癌癥是實體瘤，優選地，所述實體瘤是高表達間皮素的實體瘤，包括卵巢癌、胃癌和肺癌。