[發(fā)明專利]一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011640010.3
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112779286B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李曉軍;張家勛;吳維青;孫寧;楊陽(yáng);崔英霞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍東部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;A01K67/027;A61K49/00
• 代理公司: 南京知識(shí)律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 萬(wàn)婧

1.一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征是利用CRISPR/Cas9技術(shù)在小鼠Col4a5基因的17號(hào)外顯子上刪除980-983位點(diǎn)的4個(gè)堿基ATGG；

1)設(shè)計(jì)表達(dá)針對(duì)鼠源Col4a5基因17號(hào)外顯子的sgRNA質(zhì)粒，所述鼠源Col4a5基因17號(hào)外顯子序列如SEQ?ID?NO:1所示，sgRNA序列名稱為：

Gps00000073-Col4a5-S1，sgRNA序列(5’-3’)為：ACCTTTTCACCATCTCTTCC，PAM為:TGG；

2)利用體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)獲得相應(yīng)sgRNA；

3)將sgRNA及Cas9?mRNA或Cas9蛋白轉(zhuǎn)至鼠受精卵細(xì)胞中，并將受精卵移植入受體母鼠生產(chǎn)小鼠。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：還包括利用引物鑒定小鼠基因型的步驟。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：鑒定小鼠基因型使用的引物序列如SEQ?ID?NO:2和SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:3和SEQ?ID?NO:4所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：還包括對(duì)小鼠模型進(jìn)行血液、尿液生化指標(biāo)系統(tǒng)指標(biāo)評(píng)價(jià)或病理組織學(xué)檢查評(píng)價(jià)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述血液、尿液生化指標(biāo)系統(tǒng)指標(biāo)包括血液白蛋白、血液肌酐、血液尿素氮或尿液ACR(Albumin/Urine?Creatinine?Ratio，尿微量白蛋白和肌酐的比值)。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種Alport綜合征小鼠模型的構(gòu)建方法，其特征在于：所述病理組織學(xué)檢查包括HE染色和PAS染色、腎臟電子顯微鏡檢查或IV型膠原α5鏈染色。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法獲得的Col4a5基因Del-ATGG小鼠作為Alport綜合征研究的模型鼠的用途。