[發明專利]一種水稻中轉基因的檢測方法

在審

• 申請號: 202011639428.2
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112725423A
• 公開（公告）日: 2021-04-30
• 發明（設計）人: 張萍;張莉;李丹;韓文書
• 申請（專利權）人: 鎮江華大檢測有限公司
• 主分類號: C12Q1/686
• 分類號: C12Q1/686
• 代理公司: 南京創略知識產權代理事務所(普通合伙) 32358
• 代理人: 朱希敏

本發明公開一種水稻中轉基因的檢測方法，應用TaqMan探針技術，根據常用的篩選基因序列、構建特異性序列、轉化體特異性序列和水稻內源基因序列，設計引物和熒光探針，對試樣中基因組DNA進行PCR擴增。在PCR反應過程中，熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步，因此可根據熒光信號的強度判定樣品中是否含有特定的基因，此方法檢測穩定，且準確。本發明解決了對水稻中轉基因成分的檢測不規范和不準確的問題。

技術領域

本發明涉及農藥殘留的測定技術領域，具體為一種水稻中轉基因的檢測方法。

背景技術

食品，指各種供人食用或者飲用的成品和原料以及按照傳統既是食品又是中藥材的物品，但是不包括以治療為目的的物品。對食品的定義為：可供人類食用或飲用的物質，包括加工食品，半成品和未加工食品，不包括煙草或只作藥品用的物質。

轉基因技術是指利用DNA重組、轉化等技術將特定的外源目的基因轉移到受體生物中，并使之產生可預期的、定向的遺傳改變。轉基因技術應用在人類社會各個領域中，較為常見的包括了利用轉基因技術生產的農作物，以及利用轉基因技術生產疫苗等。含有轉基因作物成分的食品被稱之為轉基因食品，目前市場上對轉基因產品越來越重視，尤其水稻方面的轉基因，大米是我國人民的主要主食之一，對水稻中的轉基因的檢測也越發的重要，因此，我們設計了一種水稻中轉基因的檢測方法。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明提供了一種水稻中轉基因的檢測方法，解決了對水稻中轉基因成分的檢測不規范和不準確的問題。

為了達到上述目的，本發明所采用的技術方案是：

一種水稻中轉基因的檢測方法，其特征在于：包括以下步驟，

(1)準備測定的主要儀器；

(2)對樣品進行制樣；

(3)對水稻中的DNA模板制備；

(4)對水稻中的DNA濃度測定；

(5)對檢測結果分析和判定。

前述的一種水稻中轉基因的檢測方法，所述步驟(1)中，主要儀器：定量PCR儀；冷凍研磨儀；消毒滅菌鍋；制冰機；核酸蛋白分析儀；高速冷凍離心機，臺式小型離心機，Mini個人離心機；低溫冰箱；旋渦振蕩器和微量移液器。

前述的一種水稻中轉基因的檢測方法，所述步驟(2)中，稱取約200g水稻樣品，用粉碎機或冷凍研磨儀將樣品粉碎至細粉狀。

前述的一種水稻中轉基因的檢測方法，所述步驟(3)中，DNA模板制備：每個樣品提取2個平行管，稱取200mg粉碎的樣品，加入1mL預冷至4℃的抽提液，劇烈搖動，棍勻后，在冰上靜置5min,4℃條件下10OOOg離心15min，棄上清液，放入600μL預熱到65℃的裂解液，充分重懸沉淀，在65℃恒溫保持40min，期間顛倒棍勻5次；室溫條件下，10OOOg離心10min，取上清液轉至另一新離心管中；加入5μL RNaseA，37℃恒溫保持30min，分別用等體積苯酣10g異戊醇洛液和三氯甲皖異戊醇榕液各抽提一次；室溫條件下，10OOOg離心10min，取上清液轉至另一新離心管中；加入三分之二體積異丙醇，十分之一體積3mol/L乙酸餉溶液，零下20℃放置2h-3h；在4℃條件下，10OOOg離心15min，棄上清液，用70％乙醇洗滌沉淀一次，倒出乙醇，晾干沉淀，加入50μL TE溶解沉淀，所得溶液即為樣品DNA梅液。

前述的一種水稻中轉基因的檢測方法，所述步驟(4)中，采用紫外分光光度法測定DNA濃度，所測得OD值為核酸總量，紫外分光光度法檢測核酸濃度的最佳范圍是2μg/mL-50μg/mL,OD值應該在0.05-l的區間內，將DNA 溶液做適當的稀釋，放入紫外分光光度計的比色皿中，于260nm處測定其吸收峰，lOD2sonm＝50μg/mL雙鏈DNA或38μg/mL單鏈DNA，PCR級DNA搭液的OD2sonm/0D2som比值為1.7：2.0。