[發明專利]一種動物細胞核懸液的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 202011637365.7
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112662737B
• 公開（公告）日: 2021-08-24
• 發明（設計）人: 周煌凱;高川;陳飛欽;夏昊強;徐毓璇;梁國霞
• 申請（專利權）人: 廣州基迪奧生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6806
• 分類號: C12Q1/6806;C40B50/06;C12N15/10
• 代理公司: 廣州科沃園專利代理有限公司 44416
• 代理人: 張帥

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種動物細胞核懸液的制備方法及其應用。本發明提供的制備方法包括組織處理破碎、重懸、離心、沉淀、重懸、細胞篩過濾、重懸離心，最后檢測核濃度。本發明提供的動物細胞核懸液滿足各類高通量單細胞測序平臺的細胞懸液質量要求，有利于其進一步的推廣應用。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種動物細胞核懸液的制備方法及其應用。

背景技術

細胞核是真核細胞內最大、最重要的細胞結構，是細胞遺傳與代謝的控制中心，也是真核細胞區別于原核細胞最顯著的標志之一。細胞核在細胞的代謝、生長、分化中起著重要作用，是遺傳物質的主要存在部位。盡管細胞核的形狀有多種多樣，但是它的基本結構卻大致相同，主要由核被膜、染色質、核骨架、核仁及核體組成。

現有技術中，尚未發現專門的制備動物細胞核懸液的方法，一般都是直接制備動物細胞懸液，這是由于動物細胞核中包含染色質、核仁、核體等多種結構，還包含遺傳物質DNA，在實際的細胞核懸液制備過程中，怎樣保證上述物質的完整性，現有技術中并未找到解決方式。然而，在新一代高通量單細胞測序平臺中，有些情況只能將組織制備成細胞核懸液才能進行測序，如細胞體積過大的組織，高能耗伴隨的多線粒體的組織等。

現有技術中已知的細胞核懸液均是采用植物細胞核制備的，如中國專利CN103776678B公開了一種草莓細胞核懸液的制備方法，中國專利CN103940646B公開了一種紅掌細胞核懸液的制備方法，中國專利申請CN103940656B公開了一種松蘿鳳梨細胞核懸液的制備方法，上述制備過程均是利用細胞提取液提取植物細胞核，并用尼龍網過濾制得，但是對于動物細胞核懸液的制備過程，現有技術中并沒有提出。

綜上可知，市場上亟需一種可以有效制備動物細胞核懸液的技術。

發明內容

針對現有技術普遍存在的缺陷，本發明創造性的提供了一種動物細胞核懸液的制備方法及其應用。本發明制備的動物細胞核懸液可以用于單細胞轉錄組測序文庫的構建，有利于其進一步的推廣應用。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種細胞核懸液的制備方法，包含如下過程：

S1、取45～55mg的目的組織，向其中加入450～550μL的裂解液，于冰上靜置4～6min，然后將組織剪成1～3mm³大小的碎片，得含裂解液的組織碎片；

S2、將步驟S1制得的含裂解液的組織碎片轉移至研磨管，迅速按壓1～2次，并于冰上靜置3～5min，制得組織液；

S3、將步驟S2制得的組織液按壓8～12次，于冰上靜置2～3min，再次按壓14～16次，并迅速轉移至新的離心管中，制得勻漿混合液；

S4、向步驟S3制得的勻漿混合液中加入450～550μL的重懸Buffer，來回顛倒5～8次，混合均勻，然后離心，將上清液轉移至15mL離心管中，制得新的勻漿液；

S5、將步驟S4制得的新的勻漿液離心，去除上清液，加入1～2mL重懸buffer充分重懸沉淀，連續重復2次，然后向其中加入碘克沙醇，吹打混勻，并向其中加入700μL重懸buffer，再次離心，并用移液槍去除雜質及上清液，保留下層液體；

S6、向步驟S5中的下層液體中加入1～2mL重懸buffer，輕柔吹吸混合均勻，然后離心去掉上清液，最后留180～220μL于離心管內，向其中加入450～550μL的重懸buffer，輕柔吹吸重懸，制得細胞懸液；

S7、將步驟S6制得的細胞懸液用細胞篩過濾，并向其中加入450～550μL的重懸buffer，離心，收集沉淀，然后用殺菌液清洗2次，離心，去掉上清液，向沉淀中加入預冷的1×PBS，并檢測其濃度，即得。