[發(fā)明專利]紫花苜蓿的MsbHLH115基因的應(yīng)用和含有MsbHLH115基因的重組載體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011636113.2
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN114686492B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭東林;石卓;杜家歡;劉文君;張淼
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱師范大學(xué)
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;A01H5/02;A01H5/10;A01H6/82
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 王志新

本發(fā)明公開了紫花苜蓿的MsbHLH115基因的應(yīng)用和含有MsbHLH115基因的重組載體，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，本發(fā)明為了解決如何促進(jìn)植物提前開花的問題，本發(fā)明提供了一種促進(jìn)植物花期提前的方法，通過構(gòu)建重組載體pBI121?MsbHLH115，將重組載體轉(zhuǎn)入到農(nóng)桿菌中制備攜帶MsbHLH115基因的農(nóng)桿菌，然后利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤法得到攜帶MsbHLH115基因的轉(zhuǎn)基因植物，通過培養(yǎng)攜帶MsbHLH115基因的轉(zhuǎn)基因植物，發(fā)現(xiàn)此植物會提前開花，本發(fā)明的方法具有方便、快捷和耗時短的優(yōu)點，利用該方法得到的植物的開花時間比野生型顯著提前。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及紫花苜蓿的MsbHLH115基因的應(yīng)用和含有MsbHLH115基因的重組載體。

背景技術(shù)

紫花苜蓿(Medicago?sativa?L.)是一種重要的多年生優(yōu)質(zhì)牧草豆科植物，抗逆性強(qiáng)，是優(yōu)異的植物種質(zhì)資源，蘊(yùn)含豐富的有益基因。植物的花期受多種因素影響，尤其受到相關(guān)基因的調(diào)控?？s短從營養(yǎng)生長到生殖生長的準(zhǔn)備階段，能夠縮短植物的種植成本，實現(xiàn)一年多熟，對于合理節(jié)約利用土地資源，在減少投入的基礎(chǔ)上創(chuàng)造更高的經(jīng)濟(jì)價值具有重要的意義，對于在生長條件受氣候限制的地區(qū)推廣種植作物也具有應(yīng)用價值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決如何促進(jìn)植物提前開花的技術(shù)問題，本發(fā)明為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種紫花苜蓿的MsbHLH115基因在促進(jìn)植物提前開花中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地限定，所述MsbHLH115基因的序列如SEQ?ID?NO.3所示。

進(jìn)一步地限定，所述的植物為煙草。

本發(fā)明還提供了一種含有MsbHLH115基因的重組載體，所述的重組載體為重組載體pBI121-MsbHLH115。

進(jìn)一步地限定，紫花苜蓿的MsbHLH115基因在促進(jìn)植物開花的方法，具體步驟如下：

(1)構(gòu)建上述的重組載體pBI121-MsbHLH115；

(2)制備攜帶MsbHLH115基因的農(nóng)桿菌：將步驟(1)得到的重組載體pBI121-MsbHLH115轉(zhuǎn)入到農(nóng)桿菌感受態(tài)中培養(yǎng)，得到攜帶MsbHLH115基因的農(nóng)桿菌；

(3)制備攜帶MsbHLH115基因的植物：培養(yǎng)植物的種子達(dá)到苗期，然后對植物進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)處理，然后將步驟(2)中得到的農(nóng)桿菌侵染預(yù)培養(yǎng)處理后的植物，然后經(jīng)過芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)和移栽馴化，得到攜帶MsbHLH115基因的植物；

(4)培養(yǎng)攜帶MsbHLH115基因的植物：

進(jìn)一步地限定，步驟(1)所述重組載體的構(gòu)建方法為利用限制性內(nèi)切酶分別酶切載體pMD18T-MsbHLH115和pBI121質(zhì)粒，得到MsbHLH115基因的序列片段與pBI121質(zhì)粒的酶切產(chǎn)物，然后將MsbHLH115基因的序列片段與pBI121質(zhì)粒的酶切產(chǎn)物進(jìn)行連接反應(yīng)，連接反應(yīng)的體系是：5μL的pBI121質(zhì)粒酶切產(chǎn)物、3μL的MsbHLH115基因的序列片段、1μL的10×T4DNA連接緩沖液和1μL的T4?DNA連接酶，反應(yīng)溫度為16℃，反應(yīng)時間為12h，獲得重組載體pBI121-MsbHLH115。

進(jìn)一步地限定，所述限制性內(nèi)切酶為Xba?I和BamHI。

進(jìn)一步地限定，步驟(3)中植物的種子達(dá)到成苗期。

進(jìn)一步地限定，步驟(3)中農(nóng)桿菌侵染植物的步驟如下：

1)將攜帶重組載體pBI121-MsbHLH11的農(nóng)桿菌涂布于含有卡那霉素、鏈霉素和利福平的YEB固體培養(yǎng)基上，在28℃條件下，培養(yǎng)48h；