[發(fā)明專利]紫花苜蓿的MsbHLH115基因的應(yīng)用和含有MsbHLH115基因的重組載體

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011636113.2
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN114686492B
• 公開（公告）日: 2023-08-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭東林;石卓;杜家歡;劉文君;張淼
• 申請（專利權(quán)）人: 哈爾濱師范大學(xué)
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C12N15/84;A01H5/02;A01H5/10;A01H6/82
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 王志新

1.紫花苜蓿的MsbHLH115基因在促進植物提前開花中的應(yīng)用，其特征在于，所述MsbHLH115基因的序列如SEQ?ID?NO.3所示；所述的植物為煙草。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，紫花苜蓿的MsbHLH115基因在促進植物提前開花的方法，具體步驟如下：

（1）構(gòu)建含有MsbHLH115基因的重組載體；所述MsbHLH115基因的序列如SEQ?ID?NO.3所示；

（2）制備攜帶MsbHLH115基因的農(nóng)桿菌：將步驟（1）得到的重組載體pBI121-MsbHLH115轉(zhuǎn)入到農(nóng)桿菌感受態(tài)中培養(yǎng)，得到攜帶MsbHLH115基因的農(nóng)桿菌；

（3）制備攜帶MsbHLH115基因的植物：培養(yǎng)植物的種子達到苗期，然后對植物進行預(yù)培養(yǎng)處理，然后將步驟（2）中得到的農(nóng)桿菌侵染預(yù)培養(yǎng)處理后的植物，然后經(jīng)過芽誘導(dǎo)、生根誘導(dǎo)和移栽馴化，得到攜帶MsbHLH115基因的植物；

（4）培養(yǎng)攜帶MsbHLH115基因的植物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（1）所述重組載體的構(gòu)建方法為利用限制性內(nèi)切酶分別酶切載體pMD18T-MsbHLH115和pBI121質(zhì)粒，得到MsbHLH115基因的序列片段與pBI121質(zhì)粒的酶切產(chǎn)物，然后將MsbHLH115基因的序列片段與pBI121質(zhì)粒的酶切產(chǎn)物進行連接反應(yīng)，連接反應(yīng)的體系是：5?μL的pBI121質(zhì)粒酶切產(chǎn)物、3?μL的MsbHLH115基因的序列片段、1?μL的10×T4?DNA連接緩沖液和1?μL的T4?DNA連接酶，反應(yīng)溫度為16?℃，反應(yīng)時間為12?h，獲得重組載體pBI121-MsbHLH115。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述限制性內(nèi)切酶為Xba?I和BamH?I。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（3）中植物的種子達到成苗期。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（3）中農(nóng)桿菌侵染植物的步驟如下：

1）將攜帶重組載體pBI121-MsbHLH11的農(nóng)桿菌涂布于含有卡那霉素、鏈霉素和利福平的YEB固體培養(yǎng)基上，在28?℃條件下，培養(yǎng)48?h；

2）利用1/2MS液體培養(yǎng)基重懸步驟1）得到的農(nóng)桿菌的菌落，得到農(nóng)桿菌的菌液，再用1/2MS將菌液稀釋至OD₆₀₀值為0.4-0.6；

3）取植物葉片，在步驟2）得到的農(nóng)桿菌的菌液中侵染5?min-7?min，將植物葉片取出放置于無菌濾紙上，吸去附著的菌液，放置于MS1培養(yǎng)基上，在黑暗條件下培養(yǎng)2?天。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（3）中預(yù)培養(yǎng)處理是將植物葉片切成1cm×1?cm的方形，預(yù)培養(yǎng)48?h。