[發(fā)明專利]高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202011635763.5
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN113156024A
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張?zhí)K利;尹文娟
• 申請（專利權(quán)）人: 常州蘭陵制藥有限公司
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74
• 代理公司: 常州市江海陽光知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32214
• 代理人: 孫曉暉

本發(fā)明公開了一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法，采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫；所述流動相A為磷酸二氫鉀緩沖液?甲醇；所述流動相B為甲醇；所述流動相A的配制方法如下：將0.05mol/L～0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液先用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH=2.0～3.0，得到磷酸二氫鉀緩沖液，再與甲醇按照80∶20～95∶5的體積比混合得到。本發(fā)明的方法通過選擇合適的流動相以及洗脫條件，能夠?qū)被核崤c各雜質(zhì)在同一色譜條件下進行快速有效的分離，氨基己酸主峰與相鄰雜質(zhì)峰、各雜質(zhì)峰之間均能達到基線分離。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于藥物分析技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法。

背景技術(shù)

氨基己酸（也即6-氨基己酸）是抗纖維蛋白溶解藥。纖維蛋白原通過其分子結(jié)構(gòu)中的賴氨酸結(jié)合部位特異性地與纖維蛋白結(jié)合，然后在激活物作用下變?yōu)槔w溶酶，該酶能裂解纖維蛋白中精氨酸和賴氨酸肽鏈，形成纖維蛋白降解產(chǎn)物，使血凝塊溶解。本品能阻抑纖溶酶原與纖維蛋白結(jié)合，防止其激活，從而抑制纖維蛋白溶解，高濃度則直接抑制纖溶酶活力，達到止血效果。氨基己酸注射液適用于防治纖維蛋白溶解亢進引起的各種出血。

文獻1公開了一種HPLC法測定氨基己酸注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)，它是采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫；流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH=2.0），流動相B為0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液（pH=2.0）-乙腈（體積比為70∶30）。該文獻測定的有關(guān)物質(zhì)只有己內(nèi)酰胺。

文獻2公開了一種氨基己酸注射液中有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究，其中LC-MS法采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫；流動相A為0.02mol/L甲酸銨緩沖液（含0.1%的甲酸），流動相B為乙腈。LC法采用的流動相為體積比25∶75的甲醇-0.55%己烷磺酸鈉溶液（含1%磷酸二氫鉀，pH=2.2）。該文獻測定的有關(guān)物質(zhì)包括己內(nèi)酰胺和氨基己酸二聚體。

然而，通過實驗發(fā)現(xiàn)，氨基己酸及其注射液中的雜質(zhì)不僅包括己內(nèi)酰胺和氨基己酸二聚體（記為3002），還包括氨基己酸三聚體（記為3003）、6-氨基己酰胺（記為3004）以及其它未知雜質(zhì)。

氨基己酸三聚體的結(jié)構(gòu)如下：。

6-氨基己酰胺的結(jié)構(gòu)如下：。

目前，尚未發(fā)現(xiàn)能夠同時測定氨基己酸及其注射液中上述所有雜質(zhì)的文獻報道。

文獻1：張靜等，“HPLC法測定氨基己酸注射液的含量及有關(guān)物質(zhì)”，《今日藥學(xué)》2019年第29卷第2期，第101-104頁。

文獻2：江文明等，“氨基己酸注射液中有關(guān)物質(zhì)檢查方法的研究”，《藥物分析雜志》2016年第36卷第7期，第1258-1262頁。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于解決上述問題，提供一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法，該方法不僅能測定出己內(nèi)酰胺和氨基己酸二聚體，還能測定出氨基己酸三聚體、6-氨基己酰胺以及其它未知雜質(zhì)。

實現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關(guān)物質(zhì)的方法，采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫；所述流動相A為磷酸二氫鉀緩沖液-甲醇；所述流動相B為甲醇。

所述流動相A中，磷酸二氫鉀緩沖液與甲醇的體積比為80∶20～95∶5；優(yōu)選為85∶15。

所述流動相A的配制方法如下：將磷酸二氫鉀溶液先用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH=2.0～3.0，得到磷酸二氫鉀緩沖液，再與甲醇按照上述體積比混合得到。

所述磷酸二氫鉀溶液的濃度為0.05mol/L～0.2mol/L，優(yōu)選為0.1mol/L。

所述梯度洗脫條件如下：0～25min，流動相B從10%升至40%；25.1～40min，流動相B=10%。