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[發明專利]高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關物質的方法在審

專利信息
申請號: 202011635763.5 申請日: 2020-12-31
公開(公告)號: CN113156024A 公開(公告)日: 2021-07-23
發明(設計)人: 張蘇利;尹文娟 申請(專利權)人: 常州蘭陵制藥有限公司
主分類號: G01N30/06 分類號: G01N30/06;G01N30/74
代理公司: 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214 代理人: 孫曉暉
地址: 213022 江蘇*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關鍵詞: 高效 色譜 測定 氨基 己酸 及其 注射液 有關 物質 方法
【說明書】:

發明公開了一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關物質的方法,采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫;所述流動相A為磷酸二氫鉀緩沖液?甲醇;所述流動相B為甲醇;所述流動相A的配制方法如下:將0.05mol/L~0.2mol/L磷酸二氫鉀溶液先用酸堿調節劑調節pH=2.0~3.0,得到磷酸二氫鉀緩沖液,再與甲醇按照80∶20~95∶5的體積比混合得到。本發明的方法通過選擇合適的流動相以及洗脫條件,能夠將氨基己酸與各雜質在同一色譜條件下進行快速有效的分離,氨基己酸主峰與相鄰雜質峰、各雜質峰之間均能達到基線分離。

技術領域

本發明屬于藥物分析技術領域,具體涉及一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關物質的方法。

背景技術

氨基己酸(也即6-氨基己酸)是抗纖維蛋白溶解藥。纖維蛋白原通過其分子結構中的賴氨酸結合部位特異性地與纖維蛋白結合,然后在激活物作用下變為纖溶酶,該酶能裂解纖維蛋白中精氨酸和賴氨酸肽鏈,形成纖維蛋白降解產物,使血凝塊溶解。本品能阻抑纖溶酶原與纖維蛋白結合,防止其激活,從而抑制纖維蛋白溶解,高濃度則直接抑制纖溶酶活力,達到止血效果。氨基己酸注射液適用于防治纖維蛋白溶解亢進引起的各種出血。

文獻1公開了一種HPLC法測定氨基己酸注射液的含量及有關物質,它是采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫;流動相A為0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(pH=2.0),流動相B為0.05mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(pH=2.0)-乙腈(體積比為70∶30)。該文獻測定的有關物質只有己內酰胺。

文獻2公開了一種氨基己酸注射液中有關物質檢查方法的研究,其中LC-MS法采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫;流動相A為0.02mol/L甲酸銨緩沖液(含0.1%的甲酸),流動相B為乙腈。LC法采用的流動相為體積比25∶75的甲醇-0.55%己烷磺酸鈉溶液(含1%磷酸二氫鉀,pH=2.2)。該文獻測定的有關物質包括己內酰胺和氨基己酸二聚體。

然而,通過實驗發現,氨基己酸及其注射液中的雜質不僅包括己內酰胺和氨基己酸二聚體(記為3002),還包括氨基己酸三聚體(記為3003)、6-氨基己酰胺(記為3004)以及其它未知雜質。

氨基己酸三聚體的結構如下:。

6-氨基己酰胺的結構如下:。

目前,尚未發現能夠同時測定氨基己酸及其注射液中上述所有雜質的文獻報道。

文獻1:張靜等,“HPLC法測定氨基己酸注射液的含量及有關物質”,《今日藥學》2019年第29卷第2期,第101-104頁。

文獻2:江文明等,“氨基己酸注射液中有關物質檢查方法的研究”,《藥物分析雜志》2016年第36卷第7期,第1258-1262頁。

發明內容

本發明的目的在于解決上述問題,提供一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關物質的方法,該方法不僅能測定出己內酰胺和氨基己酸二聚體,還能測定出氨基己酸三聚體、6-氨基己酰胺以及其它未知雜質。

實現本發明目的的技術方案是:一種高效液相色譜法測定氨基己酸及其注射液中有關物質的方法,采用流動相A與流動相B進行梯度洗脫;所述流動相A為磷酸二氫鉀緩沖液-甲醇;所述流動相B為甲醇。

所述流動相A中,磷酸二氫鉀緩沖液與甲醇的體積比為80∶20~95∶5;優選為85∶15。

所述流動相A的配制方法如下:將磷酸二氫鉀溶液先用酸堿調節劑調節pH=2.0~3.0,得到磷酸二氫鉀緩沖液,再與甲醇按照上述體積比混合得到。

所述磷酸二氫鉀溶液的濃度為0.05mol/L~0.2mol/L,優選為0.1mol/L。

所述梯度洗脫條件如下:0~25min,流動相B從10%升至40%;25.1~40min,流動相B=10%。

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