[發(fā)明專利]一種應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202011633193.6 | 申請日： | 2020-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN112858396A | 公開（公告）日： | 2021-05-28 |
| 發(fā)明（設計）人： | 鄭井元;吳永紅;周書棟;馬艷青;朱春暉;文湘鈺;李雪峰 | 申請（專利權(quán)）人： | 湖南省蔬菜研究所 |
| 主分類號： | G01N27/06 | 分類號： | G01N27/06;G01N27/20;G01N1/28 |
| 代理公司： | 長沙和雅知識產(chǎn)權(quán)代理事務所(普通合伙) 43238 | 代理人： | 林傳貴 |
| 地址： | 410011 湖*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 應用 相對 電導率 篩選 辣椒 抗白絹病 種質(zhì) 材料 方法 | ||
1.一種應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)分離并純化辣椒白絹病菌，制備病原菌接種菌餅；
(2)培育待鑒定辣椒苗，采用菌餅包埋法進行接種，將病原菌接種于辣椒苗莖基部；
(3)接種后日常管理培養(yǎng)5d，取樣檢測各植株的電導率，計算相對電導率，鑒定不同辣椒材料對辣椒白絹病的抗病性，篩選抗性材料；
所述植株電導百分率測定具體步驟為：取辣椒苗上部定型葉片，每個樣品三份各稱取0.2g，分為對照組和處理組，剪成5mm x 5mm的小塊，立即投入10ml無離子水試管中，使葉片沉入水中，浸泡7h，期間間歇振蕩，浸泡結(jié)束后，測定水溶液電導率，然后將材料煮沸20min，冷卻置室溫后加無離子水補充至10ml，再浸泡過夜，次日再測量電導率；
所述相對電導率的計算公式為：
電導百分率＝葉片煮沸前外滲液的電導值/葉片煮沸后外滲液的電導值x100％；
相對電導率＝(處理組電導百分率-對照組電導百分率)/對照組電導百分率x100％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，所述步驟(1)的具體過程為：從發(fā)病田間采集具有典型癥狀的病株，挑取菌絲或菌核接種于PDA培養(yǎng)基中，置于28℃的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)4-5d，選擇無雜菌污染、生長狀況良好的菌落，挑取白絹病菌菌絲或菌核，接入新的PDA培養(yǎng)基中，然后置入28℃的培養(yǎng)箱中暗培養(yǎng)4-5天，重復2-3次直至無雜菌污染；收集無雜菌污染的菌絲提取DNA進行18S PCR擴增，擴增序列經(jīng)測序、比對分析，結(jié)合形態(tài)學鑒定為辣椒白絹病菌后保存至冰箱備用；使用前挑取菌核或菌絲塊移至裝有PDA培養(yǎng)基的無菌培養(yǎng)皿中央，于28℃恒溫培養(yǎng)箱中進行繁殖，將培養(yǎng)4-5d的PDA培養(yǎng)基打孔，制成接種用的白絹病菌菌餅待用。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(2)中用育苗基質(zhì)培育待鑒定辣椒苗，所述育苗基質(zhì)使用前于121℃蒸汽滅菌30min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(2)中培育待鑒定辣椒苗時，先將待鑒定辣椒種子用體積分數(shù)為75％的乙醇浸泡5min，滅菌水振蕩洗滌2-3次；用質(zhì)量分數(shù)為1％的次氯酸鈉溶液消毒8-10min，滅菌水洗滌2-3次；再溫水浸種3h后28℃恒溫培養(yǎng)箱催芽，最后播種于育苗缽內(nèi)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或4所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(2)中育苗溫度為26-29℃。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(2)中所述病原菌接種時期為辣椒苗8-10片真葉完全展平。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(2)中所述菌餅包埋法具體為：將菌餅置于距辣椒苗莖基部1cm處，覆蓋0.3-0.5mm育苗基質(zhì)，接種后噴水至育苗基質(zhì)濕度飽和，并加蓋覆蓋物進行保濕處理。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(3)中所述接種后日常管理具體為：辣椒苗先暗培養(yǎng)12h，隨后轉(zhuǎn)為白天溫度27-29℃，夜間溫度25-27℃的環(huán)境條件，接種期間保持育苗基質(zhì)水分含量接近飽和。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用相對電導率篩選辣椒抗白絹病種質(zhì)材料的方法，其特征在于，步驟(3)中抗病性的評價標準為：按相對電導率：0，免疫；＞0且≤10％，高抗；＞10％且≤30％，抗病；＞30％且≤50％，中抗；＞50％且≤70％，感病；＞70％，高感。
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