[發明專利]一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 202011632314.5
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112458084A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 崔大祥;李雪玲;王亞迪;曹長風;田靜;梁輝;金彩虹
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

本發明公開了一種基于磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，可以去除抑制性物質殘留，獲得高純度的DNA，克服當前分子擴增和檢測領域中所遇到的由于抑制性物質較多而造成下游基因組DNA擴增和檢測失敗的問題。采用本發明方法提取的DNA還可適用于各種常規分子生物學操作，如酶切、PCR、實時熒光PCR、LAMP、文庫構建、Southern雜交、芯片檢測、高通量測序等。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法。

背景技術

細菌基因組DNA提取是當前分子擴增和檢測領域中最基本的實驗操作之一，有著很多經典的方法，如CTAB法，但是這些方法針對樣本中含有較多抑制性物質（如蛋白、肽鏈、RNA、多糖等）的基因組DNA提取無法達到理想的效果（尤其是在基因組含量較少的情況下），并且耗時較長，溶劑使用也對人體傷害較大。近年來，磁珠法在細菌基因組DNA提取應用中越來越多地受到關注，但也很難排除抑制性物質殘留，從而影響到下游基因組DNA擴增和檢測。因此，需要一種減少抑制性物質殘留、提高DNA純度的細菌基因組DNA提取方法。

發明內容

為去除樣本中的抑制性物質而特異性獲得DNA，克服當前分子擴增和檢測領域中所遇到的由于抑制性物質較多而造成下游基因組DNA擴增和檢測失敗的問題，本發明目的在于提供一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法。

本發明目的通過以下方案實現：一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，其特征在于基于磁珠法提取細菌基因組DNA的改進方法，可以去除抑制性物質殘留，獲得高純度的DNA，該方法包括以下步驟：

一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，其特征在于，基于磁珠法提取細菌基因組DNA，去除抑制性物質殘留，以獲得高純度的DNA，包括以下步驟：

（1）取1ml細菌培養液至1.5 ml離心管，11000 rpm離心5分鐘，棄上清液，得細菌沉淀；

（2）在細菌沉淀中加250 μl溶菌酶溶液，漩渦混和器混勻，在37℃中保溫10分鐘；

（3）取20 μl充分混勻的磁珠混合液加到離心管中，充分混勻，然后將離心管置入磁力架中，待磁珠被吸到管壁，吸出所有液體棄去；

（4）加600 μl洗滌緩沖液到離心管，從磁性架子中取下離心管，混勻后再將離心管放回磁性架子中，然后吸出所有液體棄去；加600 μl洗滌緩沖液到離心管，從磁性架子中取下離心管，混勻后再將離心管放回磁性架子中，然后吸出所有液體棄去；加600 μl洗滌緩沖液到離心管，從磁性架子中取下離心管，混勻后再將離心管放回磁性架子中，然后吸出所有液體棄去；

（5）加200 μl滅菌水到離心管，混勻，在45℃條件下保溫3分鐘后，轉入冰浴1-3分鐘，得DNA溶液；

（6）將離心管插入磁性架子中，小心地取出下面的DNA溶液到一個潔凈的離心管。

所述的溶菌酶溶液濃度為0.1g溶菌酶/10ml 10mmol/L Tris.Cl (pH 8.0)。

所述磁珠混合液為常規配制，或為市售磁珠混合液。

所述洗滌緩沖液為20 mmol/L Tris-Cl pH7.4, 1mM EDTA。

本發明提出的基于磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，去除了蛋白、肽鏈、RNA、多糖等抑制物質的干擾對DNA濃度的影響，可以避免傳統DNA提取中出現濃度低而導致下游試驗失敗的現象。

本發明的有益效果包括：

（1）DNA提取率較高，在本發明緩沖液的環境中，使DNA分子提取時減少蛋白、肽鏈、RNA、多糖等抑制物質的干擾，DNA提取率高，提取的DNA濃度可達到200ng/μL以上。

（2）DNA純度較高，RNA和蛋白質含量少。在本發明緩沖液的環境中磁珠對DNA的特異性吸附能力增強，使RNA和蛋白質無法吸附到磁珠上，DNA純度升高，OD260/280值為1.80-1.90。