[發明專利]一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法

在審

• 申請號: 202011632314.5
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112458084A
• 公開（公告）日: 2021-03-09
• 發明（設計）人: 崔大祥;李雪玲;王亞迪;曹長風;田靜;梁輝;金彩虹
• 申請（專利權）人: 上海納米技術及應用國家工程研究中心有限公司
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 上海東亞專利商標代理有限公司 31208
• 代理人: 董梅

1.一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，其特征在于，基于磁珠法提取細菌基因組DNA，去除抑制性物質殘留，以獲得高純度的DNA，包括以下步驟：

（1）取1ml細菌培養液至1.5 ml離心管，11000 rpm離心5分鐘，棄上清液，得細菌沉淀；

（2）在細菌沉淀中加250 μl溶菌酶溶液，漩渦混和器混勻，在37℃中保溫10分鐘；

（3）取20 μl充分混勻的磁珠混合液加到離心管中，充分混勻，然后將離心管置入磁力架中，待磁珠被吸到管壁，吸出所有液體棄去；

（4）加600 μl洗滌緩沖液到離心管，從磁性架子中取下離心管，混勻后再將離心管放回磁性架子中，然后吸出所有液體棄去；加600 μl洗滌緩沖液到離心管，從磁性架子中取下離心管，混勻后再將離心管放回磁性架子中，然后吸出所有液體棄去；加600 μl洗滌緩沖液到離心管，從磁性架子中取下離心管，混勻后再將離心管放回磁性架子中，然后吸出所有液體棄去；

（5）加200 μl滅菌水到離心管，混勻，在45℃條件下保溫3分鐘后，轉入冰浴1-3分鐘，得DNA溶液；

（6）將離心管插入磁性架子中，小心地取出下面的DNA溶液到一個潔凈的離心管。

2.根據權利要求1所述的一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，其特征在于，所述的溶菌酶溶液濃度為0.1g溶菌酶/10ml 10mmol/L Tris.Cl ，pH 8.0。

3.根據權利要求1所述的一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，其特征在于，所述磁珠混合液為常規配制，或為市售磁珠混合液。

4.根據權利要求1所述的一種磁珠法提取細菌基因組DNA的方法，其特征在于，所述洗滌緩沖液為20 mmol/L Tris-Cl pH7.4, 1mM EDTA。