[發(fā)明專利]一種尿液中修飾核苷及肌酐同時(shí)測定的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011631690.2
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN112858499A
• 公開（公告）日: 2021-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 宋東奎;常琦;袁航;張莉蓉;常磊;魏曉松;樊鑫;陶晉;馬琦岳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/14;G01N30/60;G01N30/30;G01N30/32;G01N30/34;G01N30/72
• 代理公司: 鄭州亦鼎知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 41188
• 代理人: 張夏謙

1.尿液中修飾核苷及肌酐的同時(shí)檢測方法，包括以下步驟：

(1)尿樣預(yù)處理制備得到待測樣本；

(2)待測混合標(biāo)準(zhǔn)溶液制備：稱取修飾核苷標(biāo)準(zhǔn)品和肌酐標(biāo)準(zhǔn)品，溶解稀釋得到不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液；稱取同位素內(nèi)標(biāo)物，溶解稀釋得到一定濃度的內(nèi)標(biāo)溶液；將上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液與內(nèi)標(biāo)溶液進(jìn)行混合得到待測混合標(biāo)準(zhǔn)溶液；

(3)將待測樣本和待測混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行液質(zhì)聯(lián)用檢測，得到修飾核苷的種類和含量；

任選的，步驟(1)待測樣本中還可以加入內(nèi)標(biāo)物。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，修飾核苷標(biāo)準(zhǔn)品含有腺苷、鳥苷、胞苷、肌苷、N6-甲基腺苷、5-甲基胞苷、3-甲基胞苷、5-甲基尿苷、3-甲基尿苷、N,N-二甲基鳥苷、假尿嘧啶核苷、尿苷、1-甲基鳥苷、1-甲基腺苷、6-O-甲基鳥苷、1-甲基次黃苷、N4-乙酰胞苷和肌酐。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，同位素內(nèi)標(biāo)物為N¹⁵-2’脫氧腺苷和d³-肌酐。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，尿樣預(yù)處理包括沉淀蛋白并分離、稀釋等步驟。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，液質(zhì)聯(lián)用檢測條件為：采用極性嵌入鍵合固定相色譜柱，流動(dòng)相A為水(含0.1％甲酸)，流動(dòng)相B為乙腈(含0.1％甲酸)，采用離子源為ESI，正離子多反應(yīng)監(jiān)測掃描。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，尿樣預(yù)處理包括將尿樣離心取上清液，用冰乙腈沉淀蛋白，渦旋震蕩，離心棄去蛋白沉淀，取上清液并用初始流動(dòng)相稀釋尿樣上清液，離心，用0.22μm的濾膜過濾上清液。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，液質(zhì)聯(lián)用檢測條件中，梯度洗脫程序?yàn)?-2min，A：99％～99％、B：1％～1％；2-7min，A：99～80％、B：1～20％；7-7.01min，A：80～5％、B：20-95％；7.01-10min，A：5％～5％、B：95％～95％；10-10.01min，A：5％～95％、B：95％～1％；10.01-13min，A：99％～99％、B：1％～1％。

8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，極性嵌入鍵合固定相色譜柱規(guī)格為3μm*150mm*2.1mm。