[發明專利]一種基因修飾的牙髓干細胞及其制備方法和應用有效
| 申請號： | 202011627921.2 | 申請日： | 2020-12-31 |
| 公開（公告）號： | CN112626031B | 公開（公告）日： | 2021-08-03 |
| 發明（設計）人： | 王華;董曦文;魯茁壯;楊月峰;吳祖澤 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍軍事科學院軍事醫學研究院 |
| 主分類號： | C12N5/10 | 分類號： | C12N5/10;C12N15/861;C12N15/16;C12N15/12;C12N15/19;A61K35/28;A61K48/00;A61P25/28 |
| 代理公司： | 北京高沃律師事務所 11569 | 代理人： | 董大媛 |
| 地址： | 100850 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因 修飾 牙髓 干細胞 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種基因修飾的牙髓干細胞，其特征在于，所述牙髓干細胞過表達骨橋蛋白、胰島素樣生長因子1和睫狀神經營養因子。
2.根據權利要求1所述的牙髓干細胞，其特征在于，所述骨橋蛋白、胰島素樣生長因子1和睫狀神經營養因子的基因的核苷酸序列分別如SEQ ID No.1~SEQ ID No.3所示。
3.權利要求1或2所述的牙髓干細胞的制備方法，包括以下步驟：
1）將骨橋蛋白、胰島素樣生長因子1和睫狀神經營養因子的基因克隆到穿梭質粒pUC57的多克隆位點，獲得重組質粒pUC57-Syn；
2）將所述重組質粒pUC57-Syn和骨架質粒pKAd5f11pES-PmeI分別酶切、Gibson組裝后的組裝產物電轉染細胞后獲得重組腺病毒Ad-OIC；
3）將所述重組腺病毒Ad-OIC感染牙髓干細胞獲得基因修飾的牙髓干細胞。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟1）中所述骨橋蛋白的基因克隆至穿梭質粒pUC57的BglII和SalI酶切位點之間；所述睫狀神經營養因子和胰島素樣生長因子1的基因順次連接后克隆至穿梭質粒pUC57的KpnI和AgeI酶切位點之間。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，在步驟3）所述重組腺病毒Ad-OIC感染牙髓干細胞前，轉染HEK293細胞進行擴增。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟3）中所述重組腺病毒Ad-OIC與牙髓干細胞的數量比例為100~150:1。
7.權利要求1或2所述基因修飾的牙髓干細胞、權利要求3~6任意一項所述的制備方法制備獲得的基因修飾的牙髓干細胞在制備治療脊髓損傷的藥物中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述藥物包括所述基因修飾的牙髓干細胞能夠接受的輔料。
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