[發(fā)明專利]一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011627780.4
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN112608894A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任建華;熊義
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 任建華
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 鄭州翊博專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41155
• 代理人: 涂連梅;周玉青

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體公開了一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基包括基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑，所述添加劑包括非必需氨基酸、pH調(diào)節(jié)劑、抗生素、促進(jìn)細(xì)胞膜合成的有機(jī)物質(zhì)成分、細(xì)胞基質(zhì)成分、細(xì)胞生長因子、維生素、微量元素、抗氧化劑。本發(fā)明間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基能夠?yàn)楦杉?xì)胞生長提供細(xì)胞生長所需的營養(yǎng)物質(zhì)，維持細(xì)胞生長環(huán)境，維持細(xì)胞活性，促進(jìn)干細(xì)胞分裂增殖，提高干細(xì)胞擴(kuò)增速度，縮短干細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間；同時(shí)，還能抑制干細(xì)胞分化但不影響干細(xì)胞的分化潛能；采用本發(fā)明的培養(yǎng)基對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行多次傳代次后，干細(xì)胞依然能夠保持其原有的生物學(xué)特性和多向分化潛能。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell，MSC）是一種源于中胚層的多能干細(xì)胞，能夠無限制自我更新，多向分化。在合適的條件下，能在體外或者體內(nèi)定向分化為脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等等，作為組織修復(fù)的種子細(xì)胞。在器官移植時(shí)使用，可以降低免疫排斥，提高移植的成功率，同時(shí)加快手術(shù)創(chuàng)口的恢復(fù)。間充質(zhì)干細(xì)胞可以在體內(nèi)或者體外培養(yǎng)擴(kuò)增，并能夠分泌大量的細(xì)胞因子，具有免疫調(diào)節(jié)、炎癥抑制等功能，用于治療免疫相關(guān)疾病。而且間充質(zhì)干細(xì)胞基本不具備免疫原性，能夠異體移植。總的來說，間充質(zhì)干細(xì)胞具有不菲的臨床醫(yī)用價(jià)值。

間充質(zhì)干細(xì)胞廣泛存在于骨髓、臍帶、胎盤、脂肪等組織和血液中，但是細(xì)胞數(shù)量極其有限，比如外周血中只有0.1%-0.01%的粒細(xì)胞為干細(xì)胞，1克脂肪組織僅含有約5×10⁴個(gè)脂肪干細(xì)胞。為了滿足科研和臨床治療的需要，初步分離的干細(xì)胞需要經(jīng)過體外培養(yǎng)增殖，這是干細(xì)胞從研究到應(yīng)用的一個(gè)重要階段。目前大多數(shù)采用的是傳統(tǒng)方法培養(yǎng)，這種情況下，培養(yǎng)基的組分通常為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，加上10%-20%的胎牛血清和一定量的抗生素，其中的血清主要功能是提供各種生長因子。然而血清的具體成分至今仍不是十分清楚，且由于其來源和批次的區(qū)別，質(zhì)量和功效也存在差別，為標(biāo)準(zhǔn)化培養(yǎng)帶來了困難。使用動(dòng)物血清時(shí)，更無法完全避免來自于動(dòng)物本身的感染源的污染，血清中包含的動(dòng)物來源的成分因子也可能引起不良反應(yīng)，給臨床使用帶來了風(fēng)險(xiǎn)。

曾經(jīng)有研究嘗試使用自體人源血清或者血小板裂解物來作為生長補(bǔ)充劑，雖然能夠滿足間充質(zhì)干細(xì)胞生長所需、避免交叉污染，但是因?yàn)閬碓从邢薅鵁o法推廣。隨著間充質(zhì)干細(xì)胞需求增大，非常有必要開發(fā)一種新的培養(yǎng)基，排除動(dòng)物血清的使用、減少潛在的風(fēng)險(xiǎn)，同時(shí)能夠提供間充質(zhì)干細(xì)胞生長所需要營養(yǎng)物質(zhì)、最大限度的促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的生長增殖。

自上世紀(jì)70年代開始，科學(xué)家就開始了無血清培養(yǎng)基的研究。最初，研究人員希望從血清中直接純化各種營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子，但是因?yàn)檠宓膹?fù)雜性和技術(shù)手段的限制，這種方法無法滿足實(shí)際需求。隨著技術(shù)水平的發(fā)展，研究人員能夠逐步了解了血清中的各種成分的功能，主要包括：營養(yǎng)物質(zhì)、生長激素、細(xì)胞基質(zhì)成分和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等等，而且能夠通過基因工程的手段大量生產(chǎn)這些成分，至此無血清培養(yǎng)基的研究開發(fā)開始取得了堅(jiān)實(shí)的發(fā)展。目前市場上的比較成熟的產(chǎn)品分別來源于SIGMA，STEM CELL和Thermofisher等公司，但其針對(duì)不同來源的間充質(zhì)干細(xì)胞，比如脂肪或者血液，都有不同的成分配方和添加劑。在此本發(fā)明充分考慮了間充質(zhì)干細(xì)胞的特殊性后，并結(jié)合市場需求，開發(fā)了一種能夠快速促進(jìn)不同來源間充質(zhì)干細(xì)胞生長的，替代傳統(tǒng)培養(yǎng)基的無血清間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題和不足，本發(fā)明的目的旨在提供一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。

為實(shí)現(xiàn)發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：

本發(fā)明第一方面提供了一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。所述間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑組成，所述添加劑包括非必需氨基酸、pH調(diào)節(jié)劑、抗生素、促進(jìn)細(xì)胞膜合成的有機(jī)物質(zhì)成分、細(xì)胞基質(zhì)成分、細(xì)胞生長因子、維生素、微量元素、抗氧化劑；所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM或DMEM/F12。