[發(fā)明專利]一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011627780.4
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN112608894A
• 公開（公告）日: 2021-04-06
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 任建華;熊義
• 申請（專利權(quán)）人: 任建華
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 鄭州翊博專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41155
• 代理人: 涂連梅;周玉青

1.一種間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和添加劑組成，所述添加劑包括非必需氨基酸、pH調(diào)節(jié)劑、抗生素、促進(jìn)細(xì)胞膜合成的有機(jī)物質(zhì)成分、細(xì)胞基質(zhì)成分、細(xì)胞生長因子、維生素、微量元素、抗氧化劑；所述基礎(chǔ)培養(yǎng)基為DMEM或DMEM/F12。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述促進(jìn)細(xì)胞膜合成的有機(jī)物質(zhì)成分組成及含量如下：膽固醇 10～15mg/L、卵磷脂8～16mg/L、鞘磷脂 80～100 mg/L、人低密度脂蛋白5～15mg/L、油酸20～25mg/L、乙醇胺 5～10mg/L和腐胺 1～5 mg/L；所述細(xì)胞基質(zhì)成分的組成及含量如下：血清白蛋白 100～500mg/L、纖連蛋白2～5mg/L和層粘連蛋白1～5 mg/L。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述細(xì)胞生長因子的成分組成及含量如下：類胰島素生長因子IGF-1 5～10 μg/L、表皮生長因子EGF 5～10 μg/L、肝細(xì)胞生長因子HGF 5～15μg/L、肝素結(jié)合性表皮生長因子HB-EGF 10～15 μg/L、成纖維細(xì)胞生長因子FGF2 40～50 μg/L、成纖維細(xì)胞生長因子FGF4 1～5 μg/L、成纖維細(xì)胞生長因子FGF19 5～10 μg/L、血管內(nèi)皮生長因子VEGF 1～10μg/L、轉(zhuǎn)化生長因子TGF-β5～10 μg/L、白血病抑制因子LIF 1～5μg/L、干細(xì)胞因子SCF 1～5 μg/L、干細(xì)胞生長因子SCGF-α 5～10μg/L、胰島素 25～30μg/L、血小板衍生生長因子PDGFAB 40～50 μg/L、血小板衍生生長因子PDGFBB 100～150μg/L、凝血酶 10～15 U/L、轉(zhuǎn)鐵蛋白0.2%、紅細(xì)胞生長素EPO 5～10μg/L、單核細(xì)胞趨化蛋白MCP-1 5～10μg/L、白介素-2 5～10μg/L、白介素-8 5～10μg/L、粒細(xì)胞集落刺激因子G-CSF 5～10μg/L、巨噬細(xì)胞集落刺激因子M-CSF 5～10 μg/L、脂質(zhì)運(yùn)載蛋白 5～10 μg/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述抗氧化劑的成分組成及含量為：還原型谷胱甘肽 1～1.5mg/L、β-巰基乙醇0.1mM；所述維生素的成分組成及含量為：維生素A 1～10 mg/L、維生素C 5～10mg/L、維生素E 10～15 mg/L；所述微量元素的成分組成及含量為：硫酸銅20～25mg/L、氯化鎂15～20 mg/L、硫酸鋅 15～20 mg/L、亞硒酸鈉1～5 μg/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述添加劑還包括含有干細(xì)胞外分泌物的溶液，所述含有干細(xì)胞外分泌物的溶液的制備方法為：采用權(quán)利要求1 所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)干細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)48～72h后，離心，取上清液，所述上清液為含有干細(xì)胞外分泌物的溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，其特征在于，所述pH調(diào)節(jié)劑為HEPES，所述HEPES與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積比為1%；所述抗生素與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積比為1%～2%；所述非必需氨基酸與基礎(chǔ)培養(yǎng)基的體積比為1%～2%，所述非必需氨基酸為MEM NEAA非必需氨基酸溶液。

7.權(quán)利要求1～6任一所述的間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基在體外培養(yǎng)干細(xì)胞中的應(yīng)用。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述為臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、脂肪干細(xì)胞或骨髓干細(xì)胞。