[發明專利]一種用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應用

在審

• 申請號: 202011624408.8
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN114689722A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發明（設計）人: 王景文;任麗鴿;林森茂;李鋰
• 申請（專利權）人: 深圳市海普瑞藥業集團股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

本發明涉及一種用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應用，所述方法包括(1)將樣品進行水解，得到含有式(I)所示化合物的水解液；(2)采用液相色譜串聯質譜對水解液進行檢測；(3)以式(I)所述化合物的質譜信號峰面積對糖胺聚糖羧酸化衍生物標準品的量做標準曲線，根據標準曲線計算樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物的含量。本發明所涉及的方法通過對糖胺聚糖羧酸化衍生物進行水解，可以穩定得到特定結構的水解產物，該結構可以通過MS檢測到并選擇其中具有較高質譜豐度的水解產物，因此可以間接計算糖胺聚糖羧酸化衍生物的量。且該檢測方法的專屬性強、準確度高、精密度好、定量限低、檢測限低。

技術領域

本發明屬于分析化學技術領域，具體涉及一種用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應用，尤其涉及一種專屬性強、準確度高、精密度好、定量限低、檢測限低的用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應用。

背景技術

現有技術例如CN105744940A和CN111670038A兩篇專利公開報道了糖胺聚糖羧酸化衍生物作為藥物具有抗腫瘤及抗腫瘤轉移活性，具有廣泛的應用前景。糖胺聚糖羧酸化衍生物為未分級肝素(UFH)經過兩步氧化反應后得到的含有糖醛酸鄰二醇結構氧化開環的雙羧酸衍生物，其屬于肝素衍生物，是一種鏈狀、結構不均一的粘多糖物質。在藥物代謝研究中，需要測定生物樣品中藥物的含量以評價該藥物的藥物代謝動力學性質。在生物樣品中直接檢測完整的結構不容易實現，而且由于生物樣品中存在多種內源性物質，例如蛋白、磷脂等，常規的多糖測試方法易受到內源性物質的干擾而無法對糖胺聚糖羧酸化衍生物進行定量測定。因此，如何提供一種準確的糖胺聚糖羧酸化衍生物的檢測方法，成為了亟待解決的問題。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應用，尤其提供一種專屬性強、準確度高、精密度好、定量限低、檢測限低的用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應用。

為達到此發明目的，本發明采用以下技術方案：

第一方面，本發明提供一種用于檢測樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法，所述方法包括如下步驟：

(1)將含糖胺聚糖羧酸化衍生物的樣品進行水解，得到含有式(I)所示化合物的水解液：

其中，各R^a獨立地為-SO₃H或-H，各R^b獨立地為H、-SO₃H或-C(O)CH₃，各R^c獨立地為-SO₃H或-H，n為0、1、2、3、4或5；

(2)采用液相色譜串聯質譜對步驟(1)得到的水解液進行檢測；

(3)根據質譜信號峰面積對糖胺聚糖羧酸化衍生物標準品的量做的標準曲線計算樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物的含量；

所述糖胺聚糖羧酸化衍生物包含式(II)所示的結構單元和任選的式(III)所示的結構單元：

其中，各R^a獨立地為-SO₃H或-H，R^b獨立地為H、-SO₃H或-C(O)CH₃，R^c獨立地為-SO₃H或-H。

優選地，所述式(I)所示化合物具有以下結構式中至少一種的結構：

其中，化合物(a)的質譜信號為MS(ESI,neg.ion)m/z:432.0[M-H]^-；