[發(fā)明專利]一種用于檢測(cè)樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法及其應(yīng)用

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011624408.8
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN114689722A
• 公開（公告）日: 2022-07-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王景文;任麗鴿;林森茂;李鋰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市海普瑞藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 潘登

1.一種用于檢測(cè)樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物含量的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：

(1)將含糖胺聚糖羧酸化衍生物的樣品進(jìn)行水解，得到含有式(I)所示化合物的水解液：

其中，各R^a獨(dú)立地為-SO₃H或-H，各R^b獨(dú)立地為H、-SO₃H或-C(O)CH₃，各R^c獨(dú)立地為-SO₃H或-H，n為0、1、2、3、4或5；

(2)采用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)步驟(1)得到的水解液進(jìn)行檢測(cè)；

(3)根據(jù)質(zhì)譜信號(hào)峰面積對(duì)糖胺聚糖羧酸化衍生物標(biāo)準(zhǔn)品的量做的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中糖胺聚糖羧酸化衍生物的含量；

所述糖胺聚糖羧酸化衍生物包含式(II)所示的結(jié)構(gòu)單元和任選的式(III)所示的結(jié)構(gòu)單元：

其中，各R^a獨(dú)立地為-SO₃H或-H，R^b獨(dú)立地為H、-SO₃H或-C(O)CH₃，R^c獨(dú)立地為-SO₃H或-H。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述式(I)所示化合物具有以下結(jié)構(gòu)式中至少一種的結(jié)構(gòu)：

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述糖胺聚糖羧酸化衍生物的重均分子量為3000-20000Da，優(yōu)選7000-14000Da，進(jìn)一步優(yōu)選8000-13500Da；

所述糖胺聚糖羧酸化衍生物的開環(huán)度為10-100％，優(yōu)選25-80％，進(jìn)一步優(yōu)選25-60％。

4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述將含糖胺聚糖羧酸化衍生物的樣品進(jìn)行水解的處理方式為加熱；

優(yōu)選地，所述加熱的溫度為70-100℃，優(yōu)選85-95℃；

優(yōu)選地，所述加熱的時(shí)間為12-168h，優(yōu)選12-120h；

優(yōu)選地，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作方法為：以糖胺聚糖羧酸化衍生物作為標(biāo)準(zhǔn)品，按照步驟(1)的方法水解其不同梯度濃度的溶液，按照步驟(2)的方法檢測(cè)不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品溶液的水解液中式(I)所示化合物的質(zhì)譜信號(hào)峰面積，以質(zhì)譜信號(hào)峰面積對(duì)糖胺聚糖羧酸化衍生物標(biāo)準(zhǔn)品的量做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述液相色譜為反相色譜、尺寸排阻色譜或親水色譜；

優(yōu)選地，所述液相色譜的流動(dòng)相為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B；所述流動(dòng)相A為六氟異丙醇和戊胺的水溶液；所述流動(dòng)相B為六氟異丙醇和戊胺的乙腈-水溶液；

優(yōu)選地，所述流動(dòng)相A為含有45-55mM六氟異丙醇和13-17mM戊胺的水溶液；所述流動(dòng)相B為含有45-55mM六氟異丙醇和13-17mM戊胺的乙腈-水溶液；所述流動(dòng)相B中乙腈與水的體積比為70:30-80:20；

優(yōu)選地，所述液相色譜的流動(dòng)相為流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，具體如下表所示。

流動(dòng)相A	2O]]>
流動(dòng)相B	2O(75/25,v/v)]]>