[發明專利]抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法

在審

• 申請號: 202011622562.1
• 申請日: 2020-12-30
• 公開（公告）號: CN112834670A
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 陳云輝;鐘勘;肖濤;楊勇;史中杰;溫鳳嬌;劉旭凌;周林芳;姜金方;周茂金
• 申請（專利權）人: 蘇州海科醫藥技術有限公司
• 主分類號: G01N30/72
• 分類號: G01N30/72;G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 北京同輝知識產權代理事務所(普通合伙) 11357
• 代理人: 劉洪勛

本發明涉及一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法，通過LC?MS/MS對血漿中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋進行分析，采用蛋白沉淀預處理方法，以替諾福韋艾拉酚胺?d5和替諾福韋?d7為內標，采用Eclipse Plus C₁₈色譜柱，梯度洗脫，電噴霧電離源(ESI)串聯質譜檢測。本發明操作簡便、分析速度快、靈敏度高、滿足臨床研究大批量樣品分析需求。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，尤其涉及一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法。

背景技術

替諾福韋艾拉酚胺是替諾福韋的前體藥物，它是一種新型核苷酸逆轉移酶抑制劑，通過進入乙肝病毒的DNA逆轉移酶中，抑制DNA的復制而用于治療慢性乙肝。富馬酸丙酚替諾福韋片由美國吉利德公司研發，2016年10月經FDA批準用于治療成人慢性乙肝，商品名為Vemlidy。替諾福韋艾拉酚胺作為親脂性藥物在人體內羧酸酯酶作用下水解為替諾福韋。目前同時分析血漿中替諾福韋艾拉酚胺和替諾福韋的技術報道較少。仿制藥臨床研究及治療性藥物監測時需要測定受試者或患者血漿中替諾福韋艾拉酚胺及替諾福韋的濃度以研究其藥動學行為。為了加速其臨床應用，需要一種簡便、準確、快速、靈敏度高的生物分析方法。

發明內容

為解決上述技術問題，本發明的目的是提供一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法，包括以下步驟：

預處理，在96孔板中加入血漿，加入內標溶液，加入甲醇:乙腈(50:50，v/v)，渦流及離心后取上清液到另一干凈96孔板中，加入含0.1％甲酸水溶液，渦流混勻，進樣20.0μL；

色譜，將待測樣品液相色譜分離，采用Eclipse Plus C₁₈色譜柱，梯度洗脫，流動相A為含0.1％甲酸和2mM醋酸銨水溶液，流動相B為乙腈，色譜運行時間5.3min；

質譜，采用電噴霧離子源，正離子檢測，噴射電壓5500V，氣體1(Gas1)60psi，氣體2(Gas2)60psi，氣簾氣體(Curtain Gas)35psi，離子源溫度550℃，碰撞誘導解離9psi，駐留時間100ms，替諾福韋艾拉酚胺定量分析離子對m/z 477.2→346.1，碰撞能量(CE)60eV，去簇電壓(DP)80V，替諾福韋定量分析離子對288.1→176.1，碰撞能量(CE)35eV，去簇電壓(DP)80V，替諾福韋艾拉酚胺-d5定量分析離子對482.3→351.2，碰撞能量(CE)60eV，去簇電壓(DP)80V，替諾福韋-d7定量分析離子對295.2→183.1，碰撞能量(CE)35eV，去簇電壓(DP)80V。

優選地，所述的一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法，所述預處理步驟，取100μL血漿樣品，加入50.0μL內標溶液，加入300μL甲醇:乙腈(50:50，v/v)，渦流及離心后取100μL上清液到另一干凈96孔板中，加入含0.1％甲酸水溶液，渦流混勻。

優選地，所述的一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法，所述內標溶液為替諾福韋艾拉酚胺-d5和替諾福韋-d7溶液。

優選地，所述的一種抗病毒藥物臨床研究血漿樣本中替諾福韋艾拉酚胺及代謝物替諾福韋濃度的生物分析方法，所述色譜步驟，色譜柱類型為Eclipse Plus C₁₈。

借由上述方案，本發明至少具有以下優點：