[發明專利]一種生物型人工肝治療所需的C3A細胞的質量控制方法及其應用

有效

• 申請號: 202011619362.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112680529B
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發明（設計）人: D·賀;J·布拉澤頓;阮海斌
• 申請（專利權）人: 山東壹瑞特生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京預立生科知識產權代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍;孟祥斌

本發明公開了一種生物型人工肝治療所需的C3A細胞的質量控制方法及其應用。利用本發明的質量控制方法篩選獲得的C3A細胞質量好，安全性高，可用于生物型人工肝大規模生產和治療中。

技術領域

本發明屬于生物醫學領域，涉及一種生物型人工肝治療所需的C3A細胞的質量控制方法及其應用。

背景技術

肝臟是一個復雜的器官，由幾種不同的細胞類型組成，但關鍵是肝細胞，并由此發揮其大部分生化功能，肝細胞在急性期反應、產生凝血因子和發生生化反應進行解毒的過程中發揮作用。當肝細胞在體外培養或擴增時，因為它們很快就會停止分化或死亡，使用它們的生存能力受到限制。因此，肝臟輔助產品在使用正常肝細胞時存在實際和理論上的障礙。來源于分化較好的肝腫瘤細胞的細胞系減輕了其中很多的實際和理論上的障礙。特定細胞系是為人體異源ELAD(Extracorporeal Liver Assist Deviece)而選擇的，即人體C3A細胞系，該特定細胞系是人體肝母細胞瘤細胞系HepG2的亞克隆系。C3A細胞快速永生化增殖，并保留同樣的肝臟功能，以利于用作肝臟支持系統治療的受試者所需的大量培養生長的細胞量，來執行受損的肝臟功能，并且在治療期間保持細胞增殖，分化和代謝活性。

在所有生長活躍的細胞培養物中，突變、衰老和進化不斷發生。維持和擴增的時間越長，這些變化積累的就越多。因此，細胞培養常常失去重要的基因型和/或表型特征，如生化特性和功能特性的改變。來源于腫瘤或基因工程的細胞系特別容易發生基因改變。除了對細胞系特性的影響外，過度傳代細胞系的使用增加了細胞穩定性，微生物、病毒或細胞交叉污染的風險。控制這些問題并實現細胞系“來源”或標準化的關鍵步驟是建立并仔細維護所有關鍵細胞系的冷凍細胞儲備。一個完善的細胞庫對于確保在產品生產的整個生命周期內，和維持產品質量和產業化有足夠的等效細胞供應是至關重要的。而細胞庫特性化的目的是確定細胞基質的特性、純度和適合于生產使用。對于解凍細胞需仔細測試以驗證以下各項：1)活性；2)無支原體或其他微生物污染物；3)細胞系一致性；4)重要的細胞系特征，以保證細胞性質的穩定性和細胞使用的安全性。

對于ELAD所需的C3A細胞的質量控制非常重要，因為只有充足的高質量的C3A細胞貯備才能滿足廣大臨床肝臟疾病患者的需求，促使病人自身肝臟細胞再生功能恢復，或延長患者生存期。

發明內容

本發明的目的之一在于提供一種生物型人工肝治療所需的C3A細胞的質量控制方法。

本發明的目的之二在于提供一種人體C3A細胞系的細胞庫，而細胞庫是生物型人工肝大規模量產的保證。

本發明的目的之三在于提供上述質量控制方法的應用。

為了實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

根據本發明的一個方面，本發明提供了一種生物型人工肝治療所需的C3A細胞的質量控制方法，保證生物型人工肝的治療質量。

進一步，所述質量控制方法包括檢測細胞性質穩定性，檢測細胞安全性；

在本發明的具體實施例中，所述質量控制方法包括以下步驟：

1)建立主細胞庫，檢測細胞性質穩定性，檢測細胞安全性；

2)建立制造商工作細胞庫，檢測細胞性質穩定性，檢測細胞安全性；

3)建立工作細胞庫，檢測細胞性質穩定性，檢測細胞安全性；

4)建立生產結束細胞庫，檢測細胞性質穩定性，檢測細胞安全性；

進一步，檢測細胞性質穩定性包括檢測細胞基因型、表型、活性。

在本發明的具體實施方案中，檢測細胞基因型使用了短串聯重復序列測試。