[發(fā)明專利]一種生物型人工肝治療所需的C3A細(xì)胞的質(zhì)量控制方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011619362.0
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112680529B
• 公開（公告）日: 2023-03-17
• 發(fā)明（設(shè)計）人: D·賀;J·布拉澤頓;阮海斌
• 申請（專利權(quán)）人: 山東壹瑞特生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888
• 代理公司: 北京預(yù)立生科知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍;孟祥斌

1.一種生物型人工肝治療所需的C3A細(xì)胞的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述質(zhì)量控制方法包括檢測細(xì)胞性質(zhì)穩(wěn)定性，檢測細(xì)胞安全性；

所述質(zhì)量控制方法包括以下步驟：

1）建立主細(xì)胞庫，檢測細(xì)胞性質(zhì)穩(wěn)定性，檢測細(xì)胞安全性；

2）建立制造商工作細(xì)胞庫，檢測細(xì)胞性質(zhì)穩(wěn)定性，檢測細(xì)胞安全性；

3）建立工作細(xì)胞庫，檢測細(xì)胞性質(zhì)穩(wěn)定性，檢測細(xì)胞安全性；

4）建立生產(chǎn)終末細(xì)胞庫，檢測細(xì)胞性質(zhì)穩(wěn)定性，檢測細(xì)胞安全性；

建立主細(xì)胞庫的方法包括如下步驟：在細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)施中對C3A細(xì)胞進(jìn)行亞培養(yǎng)并擴(kuò)增，以3×10⁶至1×10⁷細(xì)胞/瓶的細(xì)胞密度在冷凍保存液中凍存；所述冷凍保存液包括10%DMSO、20%胎牛血清、MM培養(yǎng)液；

建立制造商工作細(xì)胞庫的方法包括如下步驟：將主細(xì)胞庫中的細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、擴(kuò)增，將細(xì)胞傳代 4次，將第5代細(xì)胞以1.08×10⁷個細(xì)胞/瓶的細(xì)胞密度在冷凍保存液中凍存；所述冷凍保存液包括10%甘油、5%胎牛血清、MM培養(yǎng)液；

建立工作細(xì)胞庫的方法包括如下步驟：將制造商工作細(xì)胞庫中的細(xì)胞復(fù)蘇、培養(yǎng)、擴(kuò)增，以10⁷個細(xì)胞/瓶的細(xì)胞密度在冷凍保存液中凍存；所述冷凍保存液包括20%胎牛血清，10% DMSO、MM培養(yǎng)液；

建立生產(chǎn)終末細(xì)胞庫的方法包括將工作細(xì)胞庫中的細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中復(fù)蘇、培養(yǎng)、傳代7次；

檢測細(xì)胞性質(zhì)穩(wěn)定性包括檢測細(xì)胞基因型、表型、活性；

檢測細(xì)胞基因型使用短串聯(lián)重復(fù)序列測試；所述短串聯(lián)重復(fù)序列包括AMEL、D3S1358、D1S1656、D6S1043、D13S317、Penta E、D16S539、D18S51、D2S1338、CSF1PO、Penta D、TH01、vWA、D21S11、D7S820、D5S818、TPOX、D8S1179、D12S391、D19S433、FGA。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，檢測細(xì)胞安全性包括檢測細(xì)胞是否存在細(xì)菌、真菌、支原體污染，檢測細(xì)胞是否存在病毒污染，檢測細(xì)胞是否存在細(xì)胞交叉污染，檢測培養(yǎng)細(xì)胞的裝置是否存在污染；所述病毒包括HSV-1/2、B19、EBV、SV40、HHV5/CMV、HHV6、HHV7、HHV8、HIV-1、HIV-2、HBV、HCV、HTLV、HAV、HEV、鼠痘病毒、大鼠泰勒氏腦脊髓炎病毒、乳酸脫氫酶病毒、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、漢灘病毒、小鼠微小病毒、小鼠細(xì)小病毒、小鼠腺病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠肺炎病毒、多瘤病毒、仙臺病毒、幼鼠流行性腹瀉病毒、小鼠唾液腺病毒、呼腸孤病毒3型、K病毒、小鼠胸腺病毒、小鼠逆轉(zhuǎn)錄病毒、豬細(xì)小病毒。

3.權(quán)利要求1或2所述的方法在制備生物型人工肝治療所需的C3A細(xì)胞中的應(yīng)用。