[發(fā)明專利]多肽及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011619232.7
• 申請(qǐng)日: 2020-12-31
• 公開（公告）號(hào): CN112574286A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李利佳;古想娣;吳都;郭林峰;李曉平;胡育龍;李宇晟;李玉;許玲華;李靜;陳小鋒;李文佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 東莞市東陽(yáng)光生物藥研發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/315
• 分類號(hào): C07K14/315;C07K1/107;C07K19/00;C12N15/31;C12N15/62;A61K38/16;A61P3/10;A61P3/04;A61P1/16
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 周慧云

本發(fā)明提出了一種多肽。所述多肽與具有下列氨基酸序列的多肽相比，其N端具有修飾，所述修飾包括選自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、環(huán)化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一，(1)具有SEQ ID NO：1?6所示氨基酸序列的多肽；或(2)與(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的多肽；或(3)與(1)相比具有一個(gè)或者多個(gè)氨基酸的取代、缺失和/或添加的多肽。根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的多肽既保持了BefA蛋白促進(jìn)β細(xì)胞增殖的活性，又具有更高的穩(wěn)定性，不易降解的特性，并且具有降糖、減重及保護(hù)肝臟的潛能。

優(yōu)先權(quán)信息

本發(fā)明請(qǐng)求于2020年1月2日向中國(guó)國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的、專利申請(qǐng)?zhí)朇N202010003240.2、申請(qǐng)名稱為“多肽及其應(yīng)用”的中國(guó)專利申請(qǐng)的優(yōu)先權(quán)，并且其全部?jī)?nèi)容通過引用并入本發(fā)明。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明涉及多肽及其應(yīng)用，更具體地，本發(fā)明涉及多肽、提高BefA蛋白穩(wěn)定性或制備BefA蛋白突變體的方法、融合蛋白、核酸、重組細(xì)胞和藥物組合物及其在糖尿病等代謝疾病領(lǐng)域的應(yīng)用。

背景技術(shù)

胰島素分泌細(xì)胞的缺失一直被認(rèn)為是I型糖尿病的病因之一。在I型糖尿病中，免疫系統(tǒng)錯(cuò)誤地攻擊和破壞β細(xì)胞。近年來(lái)，研究者發(fā)現(xiàn)，缺乏具有功能的β細(xì)胞也是II型糖尿病的一個(gè)重要誘因，II型糖尿病病人晚期胰島功能逐漸下降。因此，開發(fā)能夠增加健康β細(xì)胞數(shù)量的藥物對(duì)于解決I型糖尿病或II型糖尿病晚期是非常重要的，是糖尿病研究的主要重點(diǎn)。同時(shí)，糖尿病病人常伴隨著肥胖、脂肪肝、肝功能受損等代謝綜合征，所以，開發(fā)臨床獲益更多的藥物，如減重，保護(hù)肝功等的藥物，也是非常必要的。目前市場(chǎng)上的降糖生物藥主要包括：胰島素及其類似物、GLP-1和GLP-1類似物，如利拉魯肽，杜拉糖肽。胰島素及其類似物作用機(jī)制是一個(gè)針對(duì)I型糖尿病的直接補(bǔ)充胰島素(或類似物)作用，達(dá)到胰島素降糖的作用，但是存在低血糖風(fēng)險(xiǎn)，且其沒有降低2型糖尿病患者體重，保護(hù)肝功能的作用。GLP-1及其類似物，是GLP-1的受體激動(dòng)劑，通過激動(dòng)GLP-1的受體而發(fā)揮降糖作用。GLP-1的作用方式是增加胰島素的分泌，抑制高血糖素的分泌、延緩胃排空，減少進(jìn)食量。但該類藥物半衰期短，有惡心、嘔吐等消化道不良反應(yīng)。以上藥物，雖能起到降糖作用，但是無(wú)法完全逆轉(zhuǎn)受損的胰島，患者往往需要長(zhǎng)期給藥，增加了醫(yī)藥支出和降低了患者用藥體驗(yàn)，長(zhǎng)期服藥也有可能導(dǎo)致藥物耐受現(xiàn)象。

為了改善現(xiàn)有降糖藥物的治療效果，減少副作用，開發(fā)出具有改善或者逆轉(zhuǎn)受損胰島組織的藥物，從根本上逆轉(zhuǎn)糖尿病的發(fā)展，顯得尤為關(guān)鍵，治療糖尿病的藥物仍需要進(jìn)一步開發(fā)。

Jennifer Hampton Hill等在研究斑馬魚早期幼蟲發(fā)育過程中，發(fā)現(xiàn)胰腺β細(xì)胞群的正常擴(kuò)增需要腸道微生物群，而特定的細(xì)菌可以恢復(fù)β細(xì)胞數(shù)量到正常水平。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)篩查發(fā)現(xiàn)這些細(xì)菌共享一類以前未被描述的蛋白質(zhì)，命名為BefA(β細(xì)胞增殖因子A)。BefA蛋白可以促進(jìn)斑馬魚幼蟲發(fā)育過程中β細(xì)胞增殖的活性，故對(duì)BefA蛋白進(jìn)行研究。

發(fā)明內(nèi)容

本申請(qǐng)是基于發(fā)明人對(duì)以下事實(shí)和問題的發(fā)現(xiàn)和認(rèn)識(shí)作出的：

現(xiàn)有技術(shù)中，體外原核細(xì)胞表達(dá)的BefA蛋白具有促進(jìn)β細(xì)胞增殖的活性，但BefA容易降解，難以得到高純度的完整分子量的BefA蛋白，因此大大限制了BefA蛋白的體內(nèi)外藥效研究以及臨床應(yīng)用。本申請(qǐng)的研發(fā)人員在BefA蛋白藥物的開發(fā)過程中意外而驚喜地發(fā)現(xiàn)，對(duì)BefA蛋白的N端進(jìn)行修飾，包括在N端增加氨基酸，或使N端氨基酸甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、環(huán)化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化，可大幅提高BefA蛋白的穩(wěn)定性，純化后BefA蛋白純度可達(dá)95％以上，且獲得的該BefA蛋白突變體具有促進(jìn)β細(xì)胞增殖的活性。