[發明專利]多肽及其應用

在審

• 申請號: 202011619232.7
• 申請日: 2020-12-31
• 公開（公告）號: CN112574286A
• 公開（公告）日: 2021-03-30
• 發明（設計）人: 李利佳;古想娣;吳都;郭林峰;李曉平;胡育龍;李宇晟;李玉;許玲華;李靜;陳小鋒;李文佳
• 申請（專利權）人: 東莞市東陽光生物藥研發有限公司
• 主分類號: C07K14/315
• 分類號: C07K14/315;C07K1/107;C07K19/00;C12N15/31;C12N15/62;A61K38/16;A61P3/10;A61P3/04;A61P1/16
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 周慧云

1.一種多肽，其特征在于，所述多肽與具有下列氨基酸序列的多肽相比，其N端具有修飾，所述修飾包括選自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、環化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一，

(1)具有SEQ ID NO：1-6所示氨基酸序列的多肽；或

(2)與(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的多肽；或

(3)與(1)相比具有一個或者多個氨基酸的取代、缺失和/或添加的多肽。

2.根據權利要求1所述的多肽，其特征在于，所述N端氨基酸的增加包括N端增加一個或一個以上的氨基酸，且增加的氨基酸至少有一個甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、組氨酸或脯氨酸；優選甘氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸或異亮氨酸；更優選甘氨酸。

3.根據權利要求1或2所述的多肽，其特征在于，所述的N端氨基酸的增加為N端增加一個氨基酸，所述氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、組氨酸或脯氨酸；優選甘氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸或異亮氨酸；更優選甘氨酸。

4.根據權利要求1～3中任一項所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列。

5.一種提高BefA蛋白穩定性或制備BefA蛋白突變體的方法，其特征在于，對BefA蛋白氨基酸序列的N端進行修飾，所述修飾包括選自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、環化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述BefA蛋白具有

(1)SEQ ID NO：1-6所示氨基酸序列；或

(2)與(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的序列；或

(3)與(1)相比具有一個或者多個氨基酸的取代、缺失和/或添加的氨基酸序列。

7.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述N端氨基酸的增加包括N端增加一個或一個以上的氨基酸，且增加的氨基酸至少有一個甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、組氨酸或脯氨酸；優選甘氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸或異亮氨酸；更優選甘氨酸。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述的N端氨基酸的增加為N端增加一個氨基酸，所述氨基酸為甘氨酸、丙氨酸、異亮氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、組氨酸或脯氨酸；優選甘氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸或異亮氨酸；更優選甘氨酸。

9.一種融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括伴侶蛋白、連接肽以及BefA蛋白，所述連接肽的N端與所述伴侶蛋白的C端相連，所述連接肽的C端與所述BefA蛋白的N端相連，所述連接肽適于被蛋白酶切割，以便形成游離的BefA蛋白突變體，所述游離的BefA蛋白突變體的N端相比于BefA蛋白，增加了一個或多個氨基酸。

10.根據權利要求9所述的融合蛋白，其特征在于，所述伴侶蛋白包括選自麥芽糖結合蛋白、CBP、GST、SUMO、Trx、NusA的至少之一，任選地，所述伴侶蛋白含有或不含有His標簽、Flag標簽；

任選地，所述蛋白酶為煙草蝕紋病毒的半胱氨酸蛋白酶、腸激酶、凝血酶、Xa因子蛋白酶、人鼻病毒3C蛋白酶、SUMO酶或KEX-2；

任選地，所述融合蛋白具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列。

11.一種核酸，其特征在于，編碼權利要求1～4中任一項所述的多肽或權利要求9～10中任一項所述的融合蛋白。